ELISA试剂盒的研究和实验原理

ELISA试剂盒方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定，具有灵敏度高，操作简单等优点，但是在具体实验过程中影响因素较多，并且要按照严格的说明要求，在临床检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果（即假阳性或假阴性结果）。

    引起ELISA试剂盒测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试剂因素；③操作因素。本文就标本因素对ELISA测定的影响做如下讨论。
（1）类风湿因子
人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性。ELISA检测试剂盒解决该情况的办法是：①用F（ab）2替代完整的IgG；②标本用联有热变性（63℃，10 min）IgG的固相吸附剂处理（将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效）；③检测抗原时，可以用2-巯基乙醇等加入到标本稀释液中，使RF降解。
（2）补体
ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中，抗体分子发生变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q 可以将二者连接起来，从而造成假阳性。解决的办法是：①用EDTA稀释标本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加热血清使C1q灭活。
（3）嗜异性抗体
人类血清中含有能与啮齿类动物（如鼠等）Ig （s） 结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来，也能造成假阳性。解决的办法是：可在标本稀释液中加入过量的动物Ig （s） ，但加入量不足或亚类不同时无效。
（4）嗜靶抗原的自身抗体
抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，有时能与靶抗原结合形成复合物，在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定结果。为避免以上情况出现，解决的办法是：测定前需用理化方法将其解离后再测定。

（5）交叉反应物质

类AFP样物质等，是与靶抗原有交叉反应的物质。在用多抗测定抗原时对测定结果影响不大，但在用单

细胞过氧化酶体分离试剂盒 10次
细胞溶酶体形态染色试剂盒 20次
纯化溶酶体功能中性红检测试剂盒 20次
分离溶酶体纯度双酶法（COX/AP）检测试剂盒 20次
动物细胞染色体分离试剂盒 20次
植物细胞染色体分离试剂盒 20次
酵母细胞染色体分离试剂盒 20次
ELISA试剂盒细胞/组织高尔基体粗提分离试剂盒 10次
细胞/组织活性高尔基体分离试剂盒 10次
细胞/组织高质纯化高尔基体分离试剂盒 10次
分离高尔基体纯度双酶法（GT/NCR）检测试剂盒 20次
细胞膜流动性（fluidity）荧光检测试剂盒 20次