研究人员描述了一种能克服ELISA试剂盒问题的新方法。这种被称为siPools的低成本方法，能够简单而的生成含有多达60种siRNA的混合物，将脱靶效应降低到检出限以下。 据介绍，siPools的关键一步是，设计针对同一个基因的几十种siRNA，并将这些序列结合到一个DNA模板上，不同siRNA序列之间以短序列相连。这些模板经过转录、退火和酶切就能生成成分明确的siRNA混合物。（延伸阅读：如何优化你的RNAi） 为了验证siPools的效果，研究人员选择人类基因POLG和SCYL1作为RNAi的靶标。之前有研究显示，针对这两个基因的siRNA很容易影响到MAD2基因的表达，因此它们可以作为检测脱靶效应的理想对象。 研究人员针对这两个基因，ELISA试剂盒分别设计了含有60个siRNA的siPools，然后用它们转染HeLa细胞。研究显示，在浓度相同的情况下，siPools敲低目标基因与单个siRNA一样有效。 这两个siPools都含有一个MAD2脱靶效应很强的siRNA。然而在转染之后，MAD2上并未发生可检测到的脱靶影响。研究人员随后又通过萤光素酶报告基因证实了这一点。 此外，研究人员还进行了全转录组的芯片分析。他们发现，单个脱靶siRNA除了MAD2以外还大大减少了许多其他的转录本，但siPools对MAD2和总体转录本水平都没有影响。这说明，将大量siRNA混合起来的确能够大大降低RNAi的脱靶效应。下一步，Meister将进一步评估siPools在活体内作用效果。 值得注意的是，ELISA试剂盒研究人员还将siPools成功用于长非编码RNA（lncRNA）。单个siRNA往往难以对lncRNA施加影响，这可能是因为单个siRNA难以接触到高度结构性的lncRNA分子。现在，研究团队正在构建针对lncRNA的siPool文库。 |
