(一)原理 染色体显带是沿着整个染色体的长轴，能显现出着色深浅不同、横向走行的带。显带原理尚未*弄清，从多种方法证实，染色体显带现象是染色体本身存在着带的结构。因用相差显微镜观察未染色的染色体时，也能直接观察到染色体存在着带的现象。但用特殊方法处理后，再用染料染色，则带更加清楚。随显带方法不同，显H{来的带的特点也不一样，说明带的出现又与染料特异结合有关。一般认为，易着色的阳性带(positive band)为含有A—T多的染色体节段；相反，G—C多的则不易着色，为阴性带(negative band)。有报道已被定位的正常基因和异常基因绝大部分都在阴性带区。根据推测，管家基因(house keeping gene)可能多在阳性区带，组织特异基因在阴性区带。ELISA试剂盒 (二)染色体显带方法要点 1．分带种类 根据所用显带方法不同，可分为： (1)Q带：用奎吖因(quinacrl’ne mlastard：QM)和阿的平(atebrim quinacrlne dhy—drochloride：QD)荧光染色的带，称“Q”带。 (2)G带：用Glemsa染色显带称“G”带。 (3)C带：用Giemsa染色显示异染色质部分称“C”带。 (4)R带：用特殊方法处理后，显现出与Q带和G带相反的带型称“R”带等。 目前已显现出很多种带型，如Q、G和c等带，其中G带更为多用。 2．中期染色体为获得满意的显带效果，首先需要制备出好的中期染色体标本。染色体质量好的标准是：①长度适宜，一般要稍长一些，能显出更多的带来；为此需严格控制秋木仙素的浓度、作用时间；浓度过大或作用时间过长，会使染色体短缩，对显带不利。②染色体分散均匀无重叠现象，此与低渗有密切关系；低渗不足染色体易发生重叠，低渗过度染色体易流失，故须恰到好处。③无严重单体分叉。 3．特殊处理中期染色体标本制成后，立即显带时效果往往不理想。一般要经过三个步骤：①先放置一段时间即所谓“老化”，老化时间以3~10d为宜。②在显带染色之前，对染色体标本能进行预处理，常用的办法是加温，利于显出带来；标本做预处理后可不必再老化。③用胰蛋白酶消化、NaOH、尿素、无机盐等化学试剂处理，其中以胰蛋白酶消化较好。ELISA试剂盒 (三)常用染色体显带方法 1．显Q带方法 (1)材料：中期染色体标本。 (2)器具及试剂：荧光显微镜、吸管、盖玻片、镊子；磷酸缓冲液(pH5．5～6．O)。 (3)方法： 1)漂洗：取经过干热预处理或已老化的染色体标本，置入pH 6．0缓冲液中浸5~10min。 2)染色：浸入pH 6．0的GM或QD染液中5~10min。 3)漂洗：浸入新鲜pH6．0缓冲液中漂洗2次，每次5min。 4)观察：向标本染色体面滴1～2滴新鲜缓冲液，覆以盖玻片(避免出气泡)，置荧光显微镜下观察。 (4)注意事项：观察期间，要随时滴加缓冲液，以防蒸发干涸后荧光减弱；染色后标本应充分漂洗，避免残留荧光染液，否则背底将发荧光影响观察，标本如因染色不足发光较弱，可揭去盖玻片重染。 2．显G带方法 (1)胰酶一Giemsa混合显带法：是常用的显带方法，有操作简便、经济和能长期保存的优点。有关G带显示法在文献中报道极多，但不一定都能重复出满意的效果，可能与各研究室所用材料条件有关，因此引进任何一显带法之前，还要进行预试验。 1)试剂：中期染色体标本、0．025mol／L磷酸缓冲液(称3．4克KH2P04，溶于1000ml蒸馏水中，用NaOH调到pH 6．8)甲醇、Giemsa染液、胰蛋白酶。 2)方法 ①预处理：取中期染色体标本，置60～80℃温箱中20～30min，或在37℃温箱过夜；然后浸入0．025mol／L磷酸缓冲液中，pH6．8，56℃温浴10min。 ②消化和染色：用现配的胰蛋白酶一Giemsa混合液消化和染色10~30min，混合液按如下比例配制： 0．025 mol／L磷酸缓冲液pH6．8 73．0ml 甲醇 27．0ml Giemsa干粉 50．0mg 0．25％胰酶 0．3～O．4ml ③封片：染色后用自来水冲洗(流水冲洗标本背面)，人蒸馏水漂洗数次、晾干、二甲苯透明2~3min、封人中性树脂中。 (2)Giemsa显带法 1)预处理：将标本置入60℃~80℃温箱或烤箱中20~30min；亦可在37％温箱中过夜。 2)胰酶消化：用0．85％的NaCl配制0．25％胰蛋白酶溶液(微孔滤膜无菌滤过)消化3~5min(用滴加在标本上或用染色缸消化均可)。 3)染色：取出标本片，先直立于吸水纸上除去多余胰酶液后，随即置人Giemsa染液中．染10min。 4)封片：自来水洗、蒸馏水漂洗、晾干、二甲苯透明2～3min、封人中性树胶中。 (3)注意事项：胰酶消化显带过程中，胰酶消化是重要的环节，消化不足带不出现，消化过度，染色体变得膨胀和不着色，必须把握好胰酶浓度和消化持续时问。预处理或老化是显带过程中另一个重要环节，对消化和染色有很大影响，其中干热处理是较简便易行和效果好的办法。ELISA试剂盒 |
