肿瘤干细胞鉴定

1．一般生物学特征鉴定主要通过观察肿瘤干细胞的形态和生长特征以及通过核型分打鉴定肿瘤干细胞。形态多为圆形，大小不一。倍增时间较短，细胞生长密度增加，细胞核岔裂指数较高，并且具有无限增殖能力，细胞侵袭能力较强等特征。大部分肿瘤干细胞处于G0期。

2．体外克隆形成能力或肿瘤球形成能力鉴定

(1)克隆形成试验：将分选的阴性和阳性细胞分别以低浓度接种到96孔培养板，每孔1种100～200个细胞，大约7d后观察其各自克隆形成情况。

(2)集落形成试验：白血病干细胞可进行集落形成试验，将分离的阴性和阳性细胞分别1种到合适的集落培养基中进行培养，一般14 d后观察集落(>20个细胞)形成数量。白血病干细胞能够形成小的分散的集落，并且很少发生红系细胞分化。

(3)实体瘤干细胞的肿瘤球形成试验：将分离得到的肿瘤干细胞重悬于合适的培养液中，进行倍比稀释，并接种到96孔培养板，zui终细胞稀释的范围从200个／孔到1个／孔。培养7d后，计算肿瘤球形成的总数目以及肿瘤球形成占接种细胞的比例。肿瘤干细胞形成肿瘤球能力更强，得到肿瘤球的比例也增高。

3．分化能力鉴定

(1)体外分化能力的鉴定：常采用免疫细胞化学染色、流式细胞仪分析以及RT—PCR等方法进行鉴定。

(2)体内移植试验：将肿瘤干细胞注射到有严重免疫缺陷的实验小鼠体内，如一次性注射100、200、500或1000个细胞，然后观察其体内成瘤的情况。检测分化出不同成熟细胞的能力。将肿瘤干细胞移植到NOD／SCID鼠内，细胞可以在受体鼠内连续传代，分离出的肿瘤干细胞二次移植时仍能产生具有异质性癌细胞的肿瘤，并可多次重复，得到的肿瘤与原代肿瘤一致。

4．肿瘤干细胞相关分子表达的检测 肿瘤干细胞也能检测到与干细胞自我更新和分化相关的基因表达。例如，脑肿瘤干细胞除了表达CDl33，还具有SOX一2、musashi一1、Bmi一l等神经干细胞和其他干细胞的基因特征。