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分析其他elisa试剂盒方法原理 |
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点击次数:1023 更新时间:2017-06-06 |
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其他elisa试剂盒方法原理 一、双抗体夹心法测定抗原 1.将抗原免疫种动物获得的抗体吸附于固相表面; 2.加抗原,形成抗原-抗体复合物; 3.加抗原免疫第二种动物获得的抗体,形成抗体抗原抗体复合物; 4.加酶标抗抗体(第二种动物抗体的抗体); 5.加底物。底物的降解量=抗原量。 二、直接法测定抗原 1.将抗原吸附在载体表面; 2.加酶标抗体,形成抗原—抗体复合物; 3.加底物。底物的降解量=抗原量。 三、间接法测定抗体 1.将抗原吸附于固相载体表面; 2.加抗体, 形成抗原-抗体复合物; 3.加酶标抗体; 4加底物。 测定底物的降解量=抗体量。 其他elisa试剂盒操作注意 1. 使用干净的塑料容器配置洗涤液,使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 2.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 3.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。 4.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。 5.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。 6.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 7.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。 8.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 9.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 10.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。 11.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。 12.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 ◎ELISA试剂盒质控分析 1.人员培训内容包括:①检验项目的基本原理(ELISA试剂盒原理);②熟悉检测技巧,了解易出差错的环节及难点;熟悉检测试剂性能(包括试剂盒组成,包被片段及其组成);③熟悉检测仪器的原理及性能;掌握数据处理的能力和质量控制知识;④某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班,考试合格后持证上岗。 2.基本了解 ① 1971年Engvall等人把免疫组化的EIA技术应用于临床检验发展为ELISA试剂盒技术。 ② 特点:ELISA试剂盒在固相表面组装免疫活性物质形成"免疫吸附剂"。 ③ 酶标记免疫活性物质,进行信号放大; ④ 有二步温育反应二次洗涤过程; ⑤ 灵敏度特异性相对较高。 ⑥ 局限性:只能检测到ng水平 ⑦ 精密度差(批内CV15-20%); ⑧ 线性范围窄(一个数量级); ⑨ 其他elisa试剂盒存在"HD-HOOK"效应。 |
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