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大鼠elisa试剂盒方法检测ABA的含量
点击次数:955 更新时间:2018-04-03

大鼠elisa试剂盒试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中,在今天的文章中,将为大家介绍如何用ELISA方法去检测ABA的含量!
    先将ABA蛋白质复合物与固相载体(聚苯乙烯微量滴定板)结合,然后将待测的ABA(样品或标准品)和兔抗ABA抗体加入微量滴定板的孔中,进行竞争反应,接着弃去上清液,洗涤固相表面,加入酶标二抗使其与结合在固相ABA上的抗体反应,zui后去除多余的未反应的酶标二抗,测定与固相结合的酶活性,酶活性和待测ABA含量呈负函数关系,即固相ABA结合的抗体与酶标二抗量(OD或B%)随待测ABA含量增加而减少,以一系列已知浓度的ABA的OD值制图而获得标准竞争性抑制曲线,对于未知样品B,只要在同样条件下测定反应后的OD值,就可以从标准曲线上查到ABA的量。
测定方法 
1.包被:在微量滴定板内准确加入100μLABA包被液,37℃湿盒过夜。 
2.标样稀释?:取8支试管每管加150μLDB,*管中加入50μL(2000ng/50μL)标准液,充分涡旋后,取50μL至第二号管中,同样涡旋后,取50μL到第三管;依次稀释到第六管,稀释后的标准ABA依次为1000ng、500ng、250ng、125ng、62.5ng、31.25ng、15.625ng、7.8125ng/50μL。 
3. 洗板:从37℃湿盒中取出滴定板,恢复到室温后,弃去包被液,用WB(洗涤缓冲液)洗涤三次,甩干(吸水纸)。 
4.加样:1~8孔对应加入ABA标样50μL,10号孔相应加入zui浓ABA标样,9号孔加50μLDB,三排重复;然后每孔加50μL抗体,37℃ 45分钟。 
5.洗板: 
6.加酶标二抗:每孔加100μL,37℃反应1小时。 
7.洗板: 
8.显色:各孔加10μLOPD显色液,37℃ 20分钟。 
9.大鼠elisa试剂盒终止反应:各孔加50μL 6NH2SO4。 
10.读数:490nm读取OD值。其中10号孔调零,而9号孔为zui大值(B0),1~8号孔的OD值为B。 
11.结果计算:以In(B/B0)∕(1-B/B0)为纵坐标,以标准ABA浓度的常用对数(lg[ABA])为横坐标,绘制曲线。
HPLC法含量测定    半乳糖    对照品    100226-200404        50mg
含量测定    醋酸甲萘氢醌    对照品    100228-199802        50mg
UV法含量测定    富马酸氯马斯汀    对照品    100229-200402        100mg
HPLC含量测定    果糖    对照品    100231-200303        50mg
检查    环吡酮胺    对照品    100232-200201        50mg
比色法检查;环拉酸钠中VIS法检查用    环己胺    对照品    100233-200301        100mg
HPLC含量测定    环磷酰胺    对照品    100234-200502        100mg
检查    己内酰胺    对照品    100235-199701        50mg
含量测定    磷酸苯丙哌啉    对照品    100237-199701        50mg
含量测定    米诺地尔    对照品    100238-199701        50mg
大鼠elisa试剂盒

 

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