依据待测样品数量加上规范品的数量决议所需的板条数。每个规范品和空白孔建议做复孔。每个样品依据自己的数量来定，人ELISA试剂盒能运用复孔的尽量做复孔。

      参加稀释好后的规范品50ul于反应孔、参加待测样品50ul于反应孔内。当即参加50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，悄悄振动混匀，37℃温育1小时。

      甩去孔内液体，每孔加满洗刷液，振动30秒，甩去洗刷液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。ELISA试剂盒假如用洗板机洗刷，洗刷次数添加一次。每孔参加80ul的亲和链酶素-HRP，悄悄振动混匀，37℃温育30分钟。

      甩去孔内液体，每孔加满洗刷液，振动30秒，甩去洗刷液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗刷，洗刷次数添加一次。每孔参加底物A、B各50ul，ELISA试剂盒悄悄振动混匀，37℃温育10分钟，避免光照。