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假结核耶尔森菌PCR检测试剂盒几点扩增产物分析
点击次数:1101 更新时间:2020-08-12

假结核耶尔森菌PCR检测试剂盒扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅

1)常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系

3) 与反应起始时RNA的总量及纯度有关

4) 建议在试验中加入对照RNA

5) 第一链的反应产物在进行PCR扩增时,在总的反应体系中的含量不要超过1/10

6) 建议用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物(GSP)用于第一链合成。由于RNA模板存在二级结构,如环状结果,有可能导致GSP无法与模板退火;或SSⅡ反转录酶无法从此引物进行有效延伸。

7) 目的mRNA中含有强的转录中止位点,可以试用以下方法解决:

a. 将第一链的反应温度提高至50℃。

b. 使用随机六聚体代替Oligo(dT)进行第一链反应。

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