小鼠Wnt-3a蛋白(WNT3A)elisa检测试剂盒操作步骤:
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同3。 8. 洗涤:操作同5。 9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟。 人胚肺二倍体细胞;KMB-17 人胚肾细胞;293 [HEK-293] 人脐静脉内皮细胞;HUV-EC 人肺细胞;HLF-a 人胚肺成纤维细胞;WI-38 [WI38] 人胎儿胸腺细胞株;HFT-8810 [HFT8810] 人胚肺成纤维细胞;HFL1 人胚肾细胞;293 [HEK-293] 人羊膜细胞;HA 人胚肺成纤维细胞;HFL-I 人肝细胞;HL-7702[L-02] 人肝细胞;QSG-7701 [QSG7701] 人胚肺成纤维细胞;WI-38 [WI38] 人张氏肝细胞;Chang liver 人羊膜细胞;WISH 人胚肺成纤维细胞;MRC-5 人乳腺浸润性导管癌旁皮肤细胞;CCD-1095Sk 人正常乳腺细胞;Hs 578Bst 人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞;NK-92 [NK92] 人B淋巴母细胞;HMy2.CIR 人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞;NK-92MI [NK92MI] 人脐静脉内皮细胞;HUV-EC-C 人正常乳腺上皮细胞;MCF 10A 人胚肾细胞;2V6.11 人正常肺上皮细胞;BEAS-2B 人肺成纤维细胞;HFL1
|