人延伸蛋白A(EloA)ELISA试剂盒操作步骤: 1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同3。 8. 洗涤:操作同5。 9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟。 小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) MEF, 小鼠胚胎成纤维细胞 MM, 小鼠小胶质细胞 mCF, 小鼠心脏成纤维细胞 MN-c, 小鼠皮质神经元 细胞名称 人绒毛膜毛细血管内皮细胞 人羊膜上皮细胞 人绒毛间充质成纤维细胞 人羊膜间充质基质细胞 人绒毛膜间充质基质细胞 细胞名称 NRK-52E,大鼠肾细胞 H9c2大鼠心肌细胞(ATCC来源) NIH/3T3, 小鼠成纤维细胞系 大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) HSC-T6, 大鼠肝星状细胞系 CHO, 中国仓鼠卵巢细胞系 COS-7L, 非洲绿猴肾成纤维细胞 SF9, 昆虫卵巢细胞 BRL 3A, 大鼠肝正常细胞 HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞 HET-1A, 人食管上皮细胞 RGC-5, 小鼠视网膜神经节细胞 GC-1, 鼠精原细胞 293A,人胚肾上皮细胞系(腺病毒包装级别) hDPSCs, 人前磨牙牙髓干细胞 293T, SV40转化的人胚肾上皮细胞系 EPC, 大鼠血管内皮祖细胞 HBE, 正常人支气管上皮细胞系 HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮细胞 HUVEC-12, 人脐静脉血管内皮细胞系 HUM, 正常人主动脉平滑肌细胞 HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞
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