鼠抗人Bcl-X单克隆抗体操作步骤:
1 . 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行
⒉ 缓冲液洗 3min/2 次。
⒊ 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色,将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。
⒋ 缓冲液洗 5min/2 次。
⒌ 滴加 Ultra V Block , 在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。
(注:孵育不要超过 10 分钟,否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有 5 - 10% 正常羊血清,这一步可以省略。)
⒍ 缓冲液洗 5min/2 次。
⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小时。(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)
⒏ 缓冲液洗 5min/2 次。
9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer (增强子),在室温下孵育 20 分钟。
10 .缓冲液洗 5min/2 次。
11 .滴加 HRP Polymer (酶标二抗) ,在室温下孵育 30 分钟。
(注: HRP Polymer 对光敏感,应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。)
12 .缓冲液洗 5min/2 次。 13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen ),混匀后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分钟。(具体时间由染色深浅决定。) 14 .自来水充分冲洗,复染 ,脱水,透明,封片。 MGC80-3(人胃癌细胞) MLTC-1(小鼠睾丸间质细胞瘤细胞) Molt-4(人急性淋巴母细胞白血病细胞) MRC-5(人胚肺成纤维细胞 ) MS1(小鼠胰岛内皮细胞) MSTO-211H(人肺癌细胞) NAMALWA(人Burkitt's淋巴瘤细胞) NCI-H1299(人非小细胞肺癌细胞) NCI-H1650(人非小细胞肺癌细胞) NCI-H292(人肺癌细胞) Neuro-2a/N2a(小鼠脑神经瘤细胞) NCI-N87(人胃癌细胞) NG108-15(小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞) NIH/3T3(小鼠胚胎细胞) NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞) NRK(大鼠肾细胞) NRK-52E(大鼠肾小管导管上皮细胞) OK(负鼠肾小管细胞) OP9(小鼠骨髓基质细胞) OS-RC-2(人肾癌细胞) OVCAR-3(人卵巢癌细胞) P19(小鼠畸胎瘤细胞) P388D1(小鼠淋巴样瘤细胞)
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