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大鼠高敏甲状腺素(u-T4)ELISA试剂盒​实验注意事项
点击次数:347 更新时间:2022-11-09

大鼠高敏甲状腺素(u-T4)ELISA试剂盒实验注意事项:

1)ELISA实验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制实验条件,待检样品应一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清等封闭。

2)在ELISA实验中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:

(1)ELISA实验固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等,形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。

目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管选择何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应的均一性,据此判明其吸附性能。

(2)ELISA实验包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求pH在9.0-9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4 ℃18-24 h。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它实验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度,对于多数蛋白质来说通常为1-10μg/ml。

(3)ELISA实验中酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA实验法进行初步效价的滴定。然后再固定其它条件或采取“方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式ELISA实验系统里准确地滴定其工作浓度。

(4)ELISA实验中酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显的显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30 min为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。

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