【中文名称】:NADPH-细胞色素还原酶(NCR)试剂盒 【产品规格】:50管/48样。 【保存条件】:4℃-20℃低温保存 【保质期】:6个月,所有试剂盒均提供批次。 粗酶液提取: 1、除去细胞核和线粒体等:称约0.5g组织,加入4℃预冷的1 mL试剂一,冰上充分研磨,10 000g 4℃离心30min,取上清液,转移到超速离心管中。 2、粗制微粒体:4℃,100 000g,离心60min,弃上清液。 3、除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1 mL试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g离心30min,弃上清液。 4、最终微粒体:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5 mL,盖紧后充分震荡溶解,4℃保存待测。 测定操作: 1. 分光光度计预热30 min,调节波长到550 nm,蒸馏水调零。 2. 试剂二在37℃水浴中预热30min。 3. 空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入50μL蒸馏水、900μL试剂二、50μL试剂三和10μL试剂四,迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化,第10 s和第130 s吸光值分别记为A1和A2,△A空白管=A2-A1。 4. 测定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入50μL粗酶液、900μL试剂二、50μL试剂三和10μL试剂四,迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化,第10 s和第130 s吸光值分别记为A3和A4,△A测定管=A4-A3。 试剂组成和配制: 试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加100mL蒸馏水充分溶解。 试剂二:液体×1瓶,4℃保存。 试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存。临用前配制,加2.6 mL蒸馏水充分溶解,4℃保存。 试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前配制,加550 μL蒸馏水充分溶解,4℃保存。
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