人脑啡肽(ENK)ELISA试剂盒说明书

人脑啡肽(ENK)ELISA试剂盒组成

1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶7终止液6ml×1瓶

2 酶标试剂6ml×1瓶8标准品（800pg/ml）0.5ml×1瓶

3 酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液 1.5ml×1瓶

4 样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

5 显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张

6 显色剂B液6ml×1/瓶1密封袋1个

人脑啡肽(ENK)ELISA试剂盒标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

人脑啡肽(ENK)ELISA试剂盒操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

400pg/ml5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

200pg/ml4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

100pg/ml3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

50pg/ml2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

25pg/ml号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。