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人GPER酶联免疫分析试剂盒组成说明书 |
点击次数:947 发布时间:2017/7/4 |
提 供 商: |
上海一研生物科技有限公司 |
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人GPER酶联免疫分析试剂盒使用目的: 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中GPER含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人GPER水平。用纯化的人GPER抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入GPER,再与HRP标记的GPER抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的GPER呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人GPER浓度。 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 600pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 300pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 150pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 75pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 37.5pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 人GPER酶联免疫分析试剂盒加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 配液:将30倍(48T的20倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 温育:操作同3。 洗涤:操作同5。 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 人GPER酶联免疫分析试剂盒测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 |
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