判断细胞培养基是否受到颗粒污染,可以通过浊度标准溶液对比法和显微镜观察这两种核心方法进行综合判断。 浊度标准溶液对比法 这是一种快速初筛的方法,适合日常监测。 操作步骤:将待测的细胞培养液与已知浊度梯度的标准溶液(如Formazin标准液)分别置于透明容器中,在相同光照条件下进行目视对比。 结果判断:如果培养液的浊度明显高于标准溶液,则提示可能存在颗粒污染(如细菌、真菌或细胞碎片)。 需注意区分污染颗粒与培养基沉淀(如磷酸钙结晶),后者通常分布均匀且静置后分层。 显微镜观察 这是精准确认污染类型和程度的关键步骤。 低倍镜(100×)观察:快速查看细胞的整体状态。如果细胞形态异常(如变圆、皱缩)、密度突然降低,或视野中出现大量运动的微小颗粒(细菌污染),则可能存在问题。 高倍镜(200×-400×)观察:用于识别污染物的具体形态。 细菌污染:可见大量微小、快速运动的颗粒(如杆状、球状),分布在细胞间隙或培养液中。 真菌污染:可见丝状菌丝、圆形孢子或棉絮状菌落。酵母菌污染表现为圆形、大小均一的颗粒,无明显运动。 支原体污染:普通光学显微镜难以直接观察,需结合细胞状态(如生长缓慢、形态改变)或专项检测(如DAPI染色、PCR)确认。 综合判断与注意事项 结合使用:浊度法用于快速初筛,显微镜观察用于精确认证,两者结合可提高判断准确性。 及时性:建议每天换液或传代前常规检查,避免污染扩散。 排除干扰:需注意区分污染颗粒与细胞碎片、培养基沉淀等,避免误判。
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