ELISA空白孔是用于扣除显色液本底吸光度（OD值）的关键对照，其设置需遵循以下原则：

1. 空白孔类型与作用

‌空气/水空白‌：用于仪器调零，所有孔OD值减去该孔数值。

‌底物空白‌：仅加显色剂和终止液，用于扣除底物自身显色干扰。

‌酶空白‌：在两步法实验中检测酶与板的非特异性结合，通常不设。

2. 设置方法

‌数量‌：一般设1个孔，但为减少误差可设2个复孔取平均值。

‌操作‌：空白孔不加样本和酶标试剂，仅加稀释液或终止液，其他步骤与样本孔一致。

3. 注意事项

‌双波长比色‌：若仪器支持，可不设空白孔（因可自动扣除背景）。

‌单波长比色‌：必须设空白孔以排除非特异干扰。

‌一致性‌：空白孔OD值应稳定（通常<0.1），若偏高需检查洗涤效果或试剂污染。

通过合理设置空白孔，可有效提升ELISA数据的准确性和可靠性。