小鼠神经元细胞培养是神经科学研究中的核心技术之一，广泛用于研究神经发育、突触功能、神经退行性疾病及药物筛选。常见的培养类型包括：

    原代神经元培养：直接从小鼠脑组织（如海马、大脑皮层、背根节）分离，保留体内特性但不可长期传代。

    永生化细胞系：如HT-22细胞系，可传代培养，适合高通量实验。

一、核心操作流程

‌取材与消毒‌

选E17.5天孕鼠（或出生后5-7天小鼠），酒精消毒后取脑。

显微镜下分离目标区域（如皮层、海马），避免混入其他细胞。

‌消化与过滤‌

用木瓜蛋白酶消化10-20分钟，终止后过滤去除杂质。

离心后重悬细胞，用台盼蓝染色计数。

‌接种与换液‌

按密度接种（如六孔板1.0-1.2×10⁶个/孔），4小时后换神经元专用培养基。

每3天换液，保持细胞活性。

二、关键细节

‌无菌操作‌：提前紫外线消毒超净台，全程酒精消毒。

‌消化时间‌：皮层/海马神经元10-20分钟，过长易损伤细胞。

‌培养基‌：神经元专用培养基（如Neurobasal）效果更佳。

三、注意事项

操作时保持环境稳定，避免温度波动。

鉴定可用B-Tubulin-ll免疫荧光，纯度可达90%以上。