克隆化过程中避免支原体污染，核心在于严格无菌操作、环境定期消杀与试剂源头控制，其中最关键的防控措施是：使用经支原体检测合格的血清与试剂、操作全程佩戴口罩并定期对培养箱和超净台进行干雾灭菌，同时每2–3周对细胞进行一次支原体常规检测‌。

一、源头控制：杜绝污染输入

‌确保试剂无支原体污染‌

所用‌胎牛血清、培养基、等关键试剂‌必须选择有“支原体阴性"检测报告的产品 ；

避免使用多人共用或反复冻融的试剂，防止交叉污染 。

‌细胞系来源可靠‌

新引入的杂交瘤细胞或亲本细胞必须经过‌支原体检测认证‌后再进入克隆化流程；

建议对冻存前的主细胞库（MCB）进行全项质检，包括支原体PCR或培养法检测 。

二、操作规范：构建无菌屏障

‌个人防护到位‌

进入细胞间必须穿戴‌口罩、帽子、手套、尤其注意‌口罩要覆盖口鼻‌，防止口腔来源的支原体（如口腔支原体 M. orale）传播 ；

操作前后用消毒剂擦拭手套表面，减少接触污染风险。

‌规范使用超净工作台‌

每次使用前开启紫外灭菌15–30分钟，并用75%酒精或专用消毒剂（如诺福试剂）擦拭台面 ；

禁止在操作区摆放过多物品，保持气流畅通。

‌减少频繁开闭培养箱‌

克隆化期间尽量集中操作，减少进出培养箱次数，避免外界空气带入污染物；

定期清洁CO₂培养箱水槽，可加入‌Water Shield™类支原体预防试剂‌，防止水浴环境成为污染源 。

三、环境维护：持续防控潜在风险

‌定期空间灭菌‌

推荐采用‌干雾灭菌技术‌，可高效杀灭空气中和物体表面的支原体、细菌与病毒 ；

每月至少对整个细胞间进行一次全面消杀。

‌培养设备定期处理‌

二氧化碳培养箱、离心机、冰箱等共用设备应每周清洁消毒；

使用专用支原体清除喷雾或擦拭液处理内壁和托盘 。