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ELISA试剂盒组织细胞的裂解方法
点击次数:1985 更新时间:2015-05-06
 

ELISA试剂盒裂解方法
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的zui终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果ELISA试剂盒检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。

100mg 羟苯丁酯 供检查用 常温,避光 190010-201001
1ml  N-乙烯-2-吡咯烷酮 供检查用 常温,避光 190012-201001
1ml  一缩二丙二醇 供检查用 常温,避光 190020-201001
1ml  二缩三丙二醇 供检查用 常温,避光 190021-201001
50mg 棕榈酸甲酯 供检查用 常温,避光 190030-201001
500mg 硬脂酸 供系统适用性 常温,避光 190032-201001
50mg 花生酸甲酯 供检查用 常温,避光 190035-201001
25mg 山嵛酸甲酯 供检查用 常温,避光 190037-201001
25mg 二十四烷酸甲酯 供检查用 常温,避光 190039-201001
100mg 异山梨酯 供鉴别用 常温,避光 190043-201001
1ml  乙酸薄荷酯 供鉴别用 常温,避光 190044-201001
100mg 交联聚维酮 供鉴别用 常温,避光 190045-201001
1ml  邻苯二甲酸二乙酯 供鉴别用 常温,避光 190047-201001
200mg 环拉酸钠 供鉴别用 常温,避光 190048-201001
ELISA试剂盒500mg 山嵛酸甘油酯 供鉴别用 常温,避光 190049-201001
200mg 聚丙烯酸树脂Ⅱ 供鉴别用 常温,避光 190051-201001
200mg 聚丙烯酸树脂Ⅲ 供鉴别用 常温,避光 190052-201001

 
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