细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）人葡萄膜黑色素细胞；UM培养准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
产品描述：
细胞名称 人葡萄膜黑色素细胞；UM培养
形态特性多角 生长特性贴壁生长 特征特性 培养条件F12:Ham'sF12NutrientMixture10%FBS；bFGF,霍乱毒素,异丁基甲基IBMX4.4mg/200ml 传代方法1:3传代；3~4天1次。 传代情况P5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测培养法（-） STRAmelogenin：X，Y；CSF1PO：10，12；D13S317：10，11；D16S539：9，11，12；D18S51：13，15，16；D19S433：13，16.2；D21S11：28，30，31.2；D2S1338：17，OL，19，22；D3S1358：15；D5S818：9，11；D7S820：10，11，12；D8S1179：10，12，14；FGA：24；TH01：9，9.3；TPOX：9，11；vWA：17，18； 同工酶 染色体
注意事项：
1.一般客户拿到人葡萄膜黑色素细胞；UM培养后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
DHT*小鼠双氢睾酮规格48T/96T ECF*小鼠嗜酸粒细胞趋化因子规格48T/96T CCL24*小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin2规格48T/96T CCL11*小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin1规格48T/96T CyPA*小鼠嗜环蛋白/亲环素A规格48T/96T RBP-4*小鼠视黄醇结合蛋白4规格48T/96T RBP*小鼠视黄醇结合蛋白规格48T/96T GH*小鼠生长因子规格48T/96T SS*小鼠生长抑素规格48T/96T GHRP-Ghrelin*小鼠生长激素释放肽ghrelin规格48T/96T
人葡萄膜黑色素细胞；UM培养CD339/Jagged1CD339/Jagged1抗原CD339/Jagged1CD339/Jagged1抗原0.5mgCD339/Jagged1CD339/Jagged1抗原 CD34CD34(多肽抗原)0.5mgCD34CD34(多肽抗原 CD34CD34抗原（细胞表面的唾液粘蛋白）0.5mgCD34CD34抗原（细胞表面的唾液粘蛋白 CD36CD36（多肽）0.5mgCD36CD36（多肽 CD36L1/SRB1peptide高密度脂蛋白受体/清道夫受体抗原CD36L1/SRB1peptide高密度脂蛋白受体/清道夫受体抗原0.5mgCD36L1/SRB1peptide高密度脂蛋白受体/清道夫受体抗原 CD38(human)CD38抗原（人）0.5mgCD38(human CD38(mouse,rat)CD38多肽（小鼠、大鼠）0.5mgCD38(mouse,rat CD4CD4(抗原)0.5mgCD4CD4(抗原
冷冻保存细胞之方法：
人葡萄膜黑色素细胞；UM培养冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 |
