细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）人绒癌细胞；JEG-3说明书准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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细胞名称 人绒癌细胞；JEG-3说明书
形态特性上皮样 生长特性贴壁生长 特征特性该细胞是由Kohler等从Erwin-Turner肿瘤的Woods系分离建立的6个克隆中一个，可产生hCG、胎盘催乳素、孕激素；该细胞可将类固醇前体转化为雌酮和雌二醇。 培养条件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS 传代方法1:4~1:6传代；每周换液2~3次。 传代情况C5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测培养法（-） STRAmelogenin：X，Y；CSF1PO：11，12；D13S317：9，11；D16S539：13，14；D18S51：14；D19S433：13，15；D21S11：30；D2S1338：24；D3S1358：15，16；D5S818：10，11；D7S820：10，12；D8S1179：12；FGA：23，24；TH01：9，9.3；TPOX：8；vWA：16； 同工酶 染色体62~71
注意事项：
1.一般客户拿到人绒癌细胞；JEG-3说明书后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
NF*人神经丝蛋白规格48T/96T NF*人神经丝蛋白规格48T/96T 人神经生长导向因子Slit2ELISAKit，48T/96T*人神经生长导向因子Slit2ELISAKit，48T/96T规格48T/96T fractalkine/CX3CL1*人神经趋化蛋白规格48T/96T GFAP*人神经胶质纤维酸性蛋白规格48T/96T NT*人神经降压素规格48T/96T NKB*人神经激肽B规格48T/96T CVNPF*人神经保护因子规格48T/96T NA*人神经氨酸酶规格48T/96T ENA-78/CXCL5*人上皮中性粒细胞活化肽78规格48T/96T
人绒癌细胞；JEG-3说明书PSAP/PAPpeptide前列腺酸性磷酸酶抗原PSAP/PAPpeptide前列腺酸性磷酸酶抗原0.5mgPSAP/PAPpeptide前列腺酸性磷酸酶抗原 PSAP/PAPpeptide(human)前列腺酸性磷酸酶抗原(人)0.5mgPSAP/PAPpeptide(human PSCA前列腺干细胞抗原PSCA前列腺干细胞抗原0.5mgPSCA前列腺干细胞抗原 PSD-95突触后密度蛋白95（抗原）0.5mgPSD-95突触后密度蛋白95（抗原 P-selectinP选择素抗原P-selectinP选择素抗原0.5mgP-selectinP选择素抗原 雌性激素肽PT141(BremelanotidePT-141)雌性激素肽1gPT141(BremelanotidePT-141 PTEN/MMAC1一种肿瘤抑制基因抗原PTEN/MMAC1一种肿瘤抑制基因抗原0.5mgPTEN/MMAC1一种肿瘤抑制基因抗原 PTEN/MMAC1(CT)human,mo,rat,pig,dog,bovine,horse,chicken一种肿瘤抑制基因抗原（C端）0.5mgPTEN/MMAC1(CT
冷冻保存细胞之方法：
人绒癌细胞；JEG-3说明书冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 |
