细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H2087图片准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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细胞名称 人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H2087图片
形态特性上皮样 生长特性悬浮生长，有少数细胞疏松贴壁 特征特性该细胞是1988年11月从一名69岁白人男性（60年烟龄）非小细胞性肺腺癌淋巴结转移组织中分离得到的。 培养条件DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)0.02mg/ml胰岛素＋0.01mg/ml转铁蛋白＋25nM＋50nM＋1ng/mlEGF＋0.01mM乙酰胺＋0.01mM磷酸乙醇胺＋100pM*腺原氨酸＋0.5%(w/v)牛血清白蛋白＋10mMHEPES＋0.5mM丙酮酸钠＋2mML-谷氨酰胺。 传代方法1:2~1:4传代；每周换液2次。 传代情况 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测培养法（-） STRAmelogenin：X；CSF1PO：12；D13S317：11；D16S539：9，11；D18S51：13,15,17；D19S433：13,14；D21S11：30,32.2；D2S1338：22,24；D3S1358：15,17；D5S818：11；D7S820：8,10；D8S1179：10,12；FGA：20；TH01：7,9；TPOX：11；vWA：17； 同工酶 染色体
注意事项：
1.一般客户拿到人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H2087图片后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
PF*人落叶型天疱疮抗体规格48T/96T HelicalPeptide*人螺旋肽规格48T/96T RVAg*人轮状病毒抗原规格48T/96T OVAsIgG*人卵清蛋白特异性IgG规格48T/96T OVAsIgE*人卵清蛋白特异性IgE规格48T/96T 人卵巢癌标志物CA125ELISAKit，48T/96T*人卵巢癌标志物CA125ELISAKit，48T/96T规格48T/96T PEA*人绿脓杆菌外毒素A规格48T/96T TrxR*人硫氧还蛋白还原酶规格48T/96T Trx*人硫氧化还原蛋白规格48T/96T MS*人硫酸褪黑色素规格48T/96T
人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H2087图片Telomerase(TE)端粒酶（催化亚单位）（多肽抗原）0.5mgTelomerase(TE 内涎蛋白/内皮唾液酸蛋白抗原TEM1/CD248(Tumorendothelialmarker1precursor)内涎蛋白/内皮唾液酸蛋白抗原0.5mgTEM1/CD248(Tumorendothelialmarker1precursor Tenascin固生蛋白抗原Tenascin固生蛋白抗原0.5mgTenascin固生蛋白抗原 Tetracycline/BSA四环素偶联牛血清白蛋白Tetracycline/BSA四环素偶联牛血清白蛋白2mgTetracycline/BSA四环素偶联牛血清白蛋白 Tetracycline/OVA四环素偶联鸡卵白蛋白Tetracycline/OVA四环素偶联鸡卵白蛋白2mgTetracycline/OVA四环素偶联鸡卵白蛋白 凋亡相关蛋白TFAR19抗原TFAR19(TF-1cellapoptsis-relatedgene19)凋亡相关蛋白TFAR19抗原0.5mgTFAR19(TF-1cellapoptsis-relatedgene19 TFF3(trefoilfactor3)三叶肽因子3(多肽)0.5mgTFF3(trefoilfactor3 TFPI/LACI组织因子途径抑制剂TFPI/LACI组织因子途径抑制剂0.5mgTFPI/LACI组织因子途径抑制剂
冷冻保存细胞之方法：
人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H2087图片冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 |
