细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）人视网膜母细胞瘤；Y79说明书准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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细胞名称 人视网膜母细胞瘤；Y79说明书
形态特性圆 ，成簇生长 生长特性悬浮生长 特征特性1971年1月，该细胞由ReidTW及其同事从病人右眼切除的肿瘤进行原代培养建立而成，此病人有很强的视网膜母细胞瘤的母系家族遗传性。该细胞的超微结构，如核膜内折、三层膜结构、大的被膜小泡、环孔板、微管、中心粒、基粒等都与原始肿瘤相似。 培养条件RPMI1640(w/oHepes)20%FBS 传代方法1:2~1:4传代，每周2次换液。 传代情况C5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测培养法（-） STR 同工酶 染色体40~49
注意事项：
1.一般客户拿到人视网膜母细胞瘤；Y79说明书后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
listeriolysin*人单核细胞增多性李斯特菌素规格48T/96T MCP-4/CCL13*人单核细胞趋化蛋白4规格48T/96T MCP-3/CCL7*人单核细胞趋化蛋白3规格48T/96T MCP-2/CCL8*人单核细胞趋化蛋白2规格48T/96T HSV-Ag2*人单纯疱疹病毒抗原2规格48T/96T HSV-Ag1*人单纯疱疹病毒抗原-1规格48T/96T HSV-Ag1*人单纯疱疹病毒抗原-1规格48T/96T HSVⅡ-Ab*人单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体规格48T/96T MAO*人单胺氧化酶规格48T/96T BigET*人大内皮素规格48T/96T
人视网膜母细胞瘤；Y79说明书*anti-CathepsinB组织蛋白酶B抗体规格：0.1ml *Anti-DPP-I组织蛋白酶C抗体规格：0.2ml *anti-CathepsinE组织蛋白酶E抗体规格：0.1ml *Anti-CathepsinD组织蛋白酶D抗体规格：0.1ml *anti-CathepsinL组织蛋白酶L抗体规格：0.2ml *Anti-CTSG/CG组织蛋白酶G抗体规格：0.2ml *Anti-CathepsinK组织蛋白酶K抗体规格：0.2ml *Anti-CathepsinH组织蛋白酶H抗体规格：0.2ml *Anti-CBL2原癌蛋白CBL2抗体规格：0.2ml *Anti-phospho-CBL2(Tyr731)磷酸化原癌蛋白CBL2抗体规格：0.1ml
冷冻保存细胞之方法：
人视网膜母细胞瘤；Y79说明书冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 |
