细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）人结直肠腺癌细胞；Caco-2图片准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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细胞名称 人结直肠腺癌细胞；Caco-2图片
形态特性上皮细胞 生长特性贴壁生长 特征特性这株细胞分离自直肠原位癌。当长到满时，细胞表现出特征性的肠上皮细胞分化。Caco-2细胞表达维甲酸结合蛋白I和维甲酸结合蛋白II，并呈角质蛋白阳性。 培养条件MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)优质胎牛血清，10% 传代方法消化15-20分钟。1:2。4-5天长满。 传代情况P(17+5) 冻存条件*培养基+8%DMSO 支原体检测阴性 STRAmelogenin:X；CSF1PO:10；D13S317:8,12；D16S539:11,12；D18S51:17；D19S433:15,16；D21S11:30；D2S1338:21；D3S1358:15；D5S818:13；D7S820:8,11；D8S1179:15；FGA:21；TH01:7；TPOX:8；vWA:17 同工酶 染色体
注意事项：
1.一般客户拿到人结直肠腺癌细胞；Caco-2图片后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
*Anti-CD158i/KIR2DS4/FITC荧光素标记NK细胞抑制性受体2DS4抗体IgG规格：0.2ml *Anti-CD147/EMMPRIN/FITC荧光素标记细胞外基质金属蛋白酶诱导因子抗体IgG规格：0.2ml *Anti-CD151/MER2/PETA-3/FITC荧光素标记CD151抗体IgG规格：0.2ml *Anti-CD155/PVR/FITC荧光素标记CD155抗体IgG规格：0.2ml *Anti-CD160/By55/FITC荧光素标记NK细胞受体BY55抗体IgG规格：0.2ml *Anti-CD161/NK1.1/FITC荧光素标记兔抗人、大、小鼠CD161抗体IgG规格：0.2ml *Anti-CD163/M130/FITC荧光素标记CD163抗体IgG规格：0.2ml *Anti-CD166/ALCAM/FITC荧光素标记活化白细胞粘附分子抗体IgG规格：0.2ml *Anti-CD167a/DDR1/FITC荧光素标记CD167a抗体IgG规格：0.2ml *Anti-CD169/Siglec-1/sialoadhesin/FITC荧光素标记CD169抗体IgG规格：0.2ml
人结直肠腺癌细胞；Caco-2图片*Anti-SCG3/SgIII分泌粒蛋白3抗体规格：0.2ml *Anti-SCN1ASCN1A抗体规格：0.2ml *Anti-SCN2ASCN2A抗体规格：0.2ml *Anti-SCN9A/NAV1.7电压开启的钠离子通道SCN9A抗体规格：0.2ml *Anti-SCP2/NLTP固醇携带蛋白2抗体规格：0.2ml *Anti-SCP3联会复合体蛋白3抗体规格：0.2ml *Anti-SCYLV甘蔗SCYLV抗体规格：0.2ml *Anti-SDF-1/CXCL12基质细胞衍生因子－1抗体规格：0.1ml *Anti-CXCL14CXC趋化因子14抗体规格：0.2ml *Anti-Phospho-AuroraB(Thr232)/AuroraC(Thr198)磷酸化有丝分裂激酶B/C抗体规格：0.1ml
冷冻保存细胞之方法：
人结直肠腺癌细胞；Caco-2图片冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 |
