细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）人肺腺癌细胞；NCI-H441价格准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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细胞名称 人肺腺癌细胞；NCI-H441价格
形态特性上皮细胞样 生长特性贴壁生长 特征特性该细胞于1982年取自一位男性肺状腺癌患者的心包夜，该细胞系表达主要表面活性剂的脱辅基蛋白（SP-A）的mRNA和蛋白质。电子显微镜显示细胞多层薄片状和细胞质结构类似无纤毛分泌细胞颗粒。细胞可以在含或不含血清软琼脂克隆。 培养条件RPMI1640(w/oHepes)10%FBS 传代方法1:3传代,2-3天传一代 传代情况PN5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测阴性 STRAMEL:X,Y；CSF1PO:11,12；D12S391:19.3,19.3；D13S317:9,9；D16S539:9,13；D18S51:18,19；D19S433:14,14；D21S11:32.2,32.2；D2S1338:17,19；D2S441:14,14；D3S1358:18,18；D5S818:11,12；D6S1043:17,17；D7S820:10,10；D8S1179:8,14；FGA:24,25；PentaD:10,12；PentaE:12,12；TH01:9.3,9.3；T 同工酶 染色体
注意事项：
1.一般客户拿到人肺腺癌细胞；NCI-H441价格后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
*Anti-FGF5/FITC荧光素标记纤维母细胞生长因子5抗体IgG规格：0.2ml *Anti-KGF/FGF-7/FITC荧光素标记角质形成细胞生长因子受体/纤维母细胞生长因子-7抗体IgG规格：0.2ml *Anti-FGF-8/HBGF-8/FITC荧光素标记成纤维细胞生长因子-8/纤维母细胞生长因子-8抗体IgG规格：0.2ml *Anti-FGF-13/FITC荧光素标记抗纤维母细胞生长因子-13抗体IgG规格：0.2ml *Anti-FGF-10/FITC荧光素标记成纤维细胞生长因子-10/纤维母细胞生长因子-10抗体IgG规格：0.2ml *Anti-bFGF-R/FGFR1/FITC荧光素标记纤维母细胞生长因子受体1抗体IgG规格：0.2ml *Anti-PLCG1/PLCgamma1/FITC荧光素标记磷酯酶Cγ1抗体IgG规格：0.2ml *Anti-PLCG2/PLCgamma2/FITC荧光素标记磷酯酶Cγ2抗体IgG规格：0.2ml *Anti-Crkp38/CrkII/FITC荧光素标记兔抗人、大、小鼠Crkp38抗体IgG规格：0.2ml *Anti-PLCbeta3/PhospholipaseCbeta3/FITC荧光素标记磷酯酶Cβ3抗体IgG规格：0.2ml
人肺腺癌细胞；NCI-H441价格*Anti-4E-BP1/EIF4EBP1/FITC荧光素标记4E结合蛋白1抗体IgG规格：0.2ml *Anti-4EBP1(phosphoSer64)/FITC荧光素标记磷酸化4E结合蛋白1抗体IgG规格：0.2ml *Anti-4EBP1(phosphoThr37/46)/FITC荧光素标记磷酸化4E结合蛋白1抗体IgG规格：0.2ml *Anti-phospho-4EBP1(Ser65/Thr70)/FITC荧光素标记磷酸化eIF4E结合蛋白抗体IgG规格：0.2ml *Anti-14-3-3/RBITC红色荧光素罗丹明标记14-3-3抗体IgG规格：0.2ml *Anti-5-HT/FITC荧光素标记5-羟色胺抗体IgG规格：0.2ml *Anti-5-HT/RBITC红色罗丹明标记5-羟色胺抗体IgG规格：0.2ml *Anti-5-HTR1A/FITC荧光素标记5-羟色胺受体1A抗体IgG规格：0.2ml *Anti-5-HTR1B/FITC荧光素标记5-羟色胺受体1B抗体IgG规格：0.2ml *Anti-5-HTR2A/FITC荧光素标记5-羟色胺受体2A抗体IgG规格：0.2ml
冷冻保存细胞之方法：
人肺腺癌细胞；NCI-H441价格冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
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