细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）人肺癌细胞；A549 [A-549]图片准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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细胞名称 人肺癌细胞；A549 [A-549]图片
形态特性上皮样；多角 生长特性贴壁生长 特征特性该细胞系是1972年由GiardDJ通过肺癌组织移植培养建系的，源自一位58岁的白人男性。A549能通过胞苷二磷脂酰胆碱途径合成富含不饱和脂肪酸的卵磷脂；角蛋白阳性。 培养条件RPMI1640(w/oHepes)15%NBS 传代方法1：3传代；3-4天一次 传代情况PN9 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测荧光法（-） STRAmelogenin：X，Y；CSF1PO：10，12；D13S317：11；D16S539：11，12；D18S51：14，17；D19S433：13；D21S11：29；D2S1338：24；D3S1358：16；D5S818：11；D7S820：8，11；D8S1179：13，14；FGA：23；TH01：8，9.3；TPOX：8，11；vWA：14； 同工酶 染色体62-66
注意事项：
1.一般客户拿到人肺癌细胞；A549 [A-549]图片后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
*Anti-Insulin/FITC荧光素标记标记胰岛素抗体IgG规格：0.2ml *Anti-Insulin/FITC荧光素标记胰岛素抗体IgG规格：0.2ml *Anti-Insulin(1-51protein)/FITC荧光素标记胰岛素1-51蛋白抗体IgG规格：0.2ml *Anti-Integrinalpha1/CD49a/FITC荧光素标记整合素α1抗体IgG规格：0.2ml *Anti-IntegrinAlpha2/CD49b/FITC荧光素标记整合素α2抗体IgG规格：0.2ml *Anti-IntegrinAlpha2b/CD41/FITC荧光素标记血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗体IgG规格：0.2ml *Anti-IntegrinAlpha3/FITC荧光素标记整合素α3抗体IgG规格：0.2ml *Anti-IntegrinAlpha3Beta1/FITC荧光素标记整合素α3β1抗体IgG规格：0.2ml *Anti-Integrina7/FITC荧光素标记整合素α7抗体IgG规格：0.2ml *Anti-IntegrinAlphaE2/CD103/FITC荧光素标记整合素αE2抗体IgG规格：0.2ml
人肺癌细胞；A549 [A-549]图片*Anti-CD34/PE荧光素PE标记CD34抗体（细胞表面的唾液粘蛋白）IgG规格：0.2ml *Anti-CR1/CD35/FITC荧光素标记Ⅰ型补体受体抗体（C3b/C4b受体抗体）IgG规格：0.2ml *Anti-CD36/FITC荧光素标记CD36抗体IgG规格：0.2ml *Anti-CD38(human)/FITC荧光素标记抗CD38抗体（人）IgG规格：0.2ml *Anti-CD38(mouse,rat)/FITC荧光素标记抗CD38抗体（小鼠、大鼠）IgG规格：0.2ml *Anti-CD40L/FITC荧光素标记抗CD40L抗体IgG规格：0.2ml *Anti-CD34/RBITC红色荧光素罗丹明标记CD34抗体IgG规格：0.2ml *Anti-CD44/FITC荧光素标记CD44抗体IgG规格：0.2ml *Anti-CD43/SPN/FITC荧光素标记CD43抗体IgG规格：0.2ml *Anti-CD44/RBITC红色荧光素罗丹明标记CD44抗体IgG规格：0.2ml
冷冻保存细胞之方法：
人肺癌细胞；A549 [A-549]图片冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
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