直肠上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物说明书

直肠上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物【Human Rectum MatchPair: Normal Rectum Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】

人直肠上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物是从人直肠上皮细胞和肿瘤细胞中提取的，人直肠上皮细胞和肿瘤细胞分别从正常人直肠组织和肿瘤组织中制备。正常人直肠组织和肿瘤组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

 实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

肠出血性大肠杆菌致贺毒素1（Stx1）单重荧光PCR检测试剂盒481-Methyl-aminomethyl naphthalene144895

肠出血性大肠杆菌致贺毒素2（Stx2）单重荧光PCR检测试剂盒48Terbinafine911611特比萘芬

肠出血性大肠杆菌黏附抹平因子（Eae）单重荧光PCR检测试剂盒48N-[3-Chloro-(3-fluorobenzyloxy)phenyl]-iodoquinazolin-amine23127

肠出血性大肠杆菌溶血素（Hly）单重荧光PCR检测试剂盒483-Chloro-(3-fluorobenzyloxy)nitrobenzene4438829

肠产毒性大肠杆菌（ETEC）单重荧光PCR检测试剂盒485-(4-((3-chloro-((3-fluorobenzyl)oxy)phenyl)amino)quinazolin-yl)furan-carbaldehyde2312784
Fingolimod hydrochloride  162359-56-0  中文名：盐酸芬戈莫德  分子式：C19H34ClNO2  度：98.0%  关键词：    小鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISAKit  

Fingolimod  162359-55-9  中文名：芬戈莫德  分子式：C19H33NO2  度：98.0%  关键词：    小鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISAKit  

Finasteride  98319-26-7  中文名：非那雄胺  分子式：C23H36N2O2  度：98.0%  关键词：    小鼠水通道蛋白2(AQP-2)ELISAKit  

Ficaprenol 11  26296-50-4  中文名：  分子式：C55H90O  度：%  关键词：  中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠甲状腺球蛋白(TG)ELISAKit              

Fexofenadine hydrochloride  153439-40-8  中文名：盐酸非索非那定  分子式：C32H40ClNO4  度：98.0%  关键词：    小鼠双酪酸（dityrosine）ELISA试剂盒
双甘氨二肽  Gly-Gly  质量规格：>99%,BR 人红细胞原卟啉(EP)试剂盒 Human erythrocyte protoporphyrin,EP ELISA Kit

重组人胰岛素  Human recombinant Insulin  质量规格：效价测定 人琥珀酰辅酶A合成酶(SCS)试剂盒 Human succinyl coenzyme A syhetase,SCS ELISA kit

人胰岛素  Human Insulin  质量规格：测定用 人花生四烯酸(AA)ELISA检测试剂盒HumanArachidonicAcid,AAELISAKit 96T/48T

硝酸舍他康唑  Sertaconazole nitrate  质量规格：>98%,BR 人花生四烯酸(AA)试剂盒 Human Arachidonic Acid,AA ELISA Kit

醋酸依降钙素   Elcatonin Acetate  质量规格：BR 人花生四烯酸12 - 脂氧合酶，12S型(ALOX12/LOG12)试剂盒 Human ALOX12 ELISA Kit

醋酸恩夫韦地   Enfuvirtide Acetate  质量规格：BR,>98% 人花生四烯酸15脂加氧酶(ALOX15/LOG15)试剂盒 Human ALOX15/LOG15 ELISA kit

D-海藻糖无水  D-(+)-Trehalose Anhydrous  质量规格：≥99%,BR 人花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)ELISA检测试剂盒Humanarachidonate5-lipoxygenase,ALOX-5ELISAKit 96T/48T

二醋酸戈那瑞林(LH-RH)  Gonadorelin Acetate  质量规格：>98%,二醋酸盐 人花生四烯酸5脂氧合酶(ALOX5/LOG5)试剂盒 Human Arachidonate 5-lipoxygenase,ALOX5/LOG5 ELISA kit

醋酸戈舍瑞林   Goserelin Acetate  质量规格：BR,>98% 人踝蛋白(talin)ELISA检测试剂盒HumaalinELISAKit 96T/48T

醋酸亮丙瑞林   Leuprolide Acetate  质量规格：BR,>98% 人踝蛋白(talin)试剂盒 Human talin ELISA Kit
直肠上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物说明书胎球蛋白 -A(Fetuin-A)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装     Varenicline tartrate  375815-87-5  中文名：酒石酸伐仑克林  分子式：C17H19N3O6 

羧酸酯酶（CarE）测试盒   可见分光光度法   50管/48样  4,5,6,7-Tetrahydrothieno [3,2,c]pyridine hydrochloride  28783-41-7  中文名：  分子式：C7H10ClNS  度：98.0%  关键词： 

损伤分子1   英文名称：   Human Kidney Injury Molecule 1   规格：   48T/96T   英文缩写：   KIM-1  4,4'-Dimethoxytrityl chloride  40615-36-9  中文名：4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷  分子式：C21H19ClO2  度：98.0%  关键词： 

髓过氧化物酶（MPO）检测   Myeloperoxidase (MPO) detection  Rasagiline mesylate  161735-79-1  中文名：甲磺酸雷沙吉兰  分子式：3S  度：98.0%  关键词： 

髓过氧化物酶（MPO）测试盒   Myeloperoxidase (MPO) test kit  Ranitidine hydrochloride  中文名：盐酸雷尼替丁  分子式：C13H23ClN4O3S

运输和保存：
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。