宫颈上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物培养

宫颈上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物【Human Cervix MatchPair: Normal Cervix Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】

人宫颈上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物是从人宫颈上皮细胞和肿瘤细胞中提取的，人宫颈上皮细胞和肿瘤细胞分别从正常人宫颈组织和肿瘤组织中制备。正常人宫颈组织和肿瘤组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

 运输和保存：

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

肠道病毒(EV-U)实时荧光PCR检测试剂TValdecoxib1816952帕瑞考昔

肠道病毒71型(EV71)实时荧光PCR检测试剂TUzarigenin4669

柯萨奇病毒A16型（CA16）实时荧光PCR检测试剂TUzarigenin digitaloside6121

柯萨奇病毒A型（CA）实时荧光PCR检测试剂Tucralose5383三氯蔗糖

柯萨奇病毒A6型(CA6)实时荧光PCR检测试剂TTryptophan1534
Floribundone 1  118555-84-3  中文名：  分子式：C32H22O10    Humanphospho-exacellularsignal-regulatedkinase,pERKELISAKit人0酸化细胞外信号调节激酶(pERK)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Rubianthraquinone  644967-44-2  中文名：  分子式：C16H12O5    兔子凝血酶受体()ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

6-Hydroxyrubiadin  87686-86-0  中文名：6-羟基甲基异茜草素  分子式：C15H10O5    Rat fibrinogen degradation product (FDP) ELISA Kit 大鼠血纤蛋白原降解产物(FDP)ELISA试剂盒

1,5,15-Tri-O-methylmorindol  942609-65-6  中文名：  分子式：C18H16O6    Humanai-perinuclearfactor,APFELISAKit 人抗核周因子抗体(APF)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Rubiadin  117-02-2  中文名：甲基异茜草素  分子式：C15H10O4    HumandopamineD2receptor,D2RELISA试剂盒人多巴胺D2受体(D2R)ELISA试剂盒规格：96T/48T
双氯芬酸钠（标准品）  Diclofenac   质量规格：HPLC>97%,标准品 RNA聚烯酰胺凝胶电泳试剂盒10

加巴喷丁  Gabapentin  质量规格：>99.5%,USP30 RNA酶溶液(RNA酶保护分析)50毫升

加巴喷丁（标准品）  Gabapentin  质量规格：HPLC>98%,标准品 RNA清除试剂盒100

多潘立酮  Domperidone  质量规格：>99%,EP5.0 RNA探针聚合酶标记试剂盒10

多潘立酮（标准品）  Domperidone  质量规格：HPLC>99%,标准品 RNA探针同位素([α32P]CTP)聚合酶标记试剂盒20

氯硝柳胺  Niclosamide  质量规格：>99%,BR RNA样品储存液50毫升

氯硝柳胺(标准品)  Niclosamide  质量规格：HPLC>98%,标准品 RNA样品储存液50毫升

环丙沙星  Ciprofloxacin  质量规格：>99%,USP32,BR,可用于细胞培养 RNA荧光(RiboGreen)定量检测试剂盒20

环丙沙星（标准品）  Ciprofloxacin  质量规格：HPLC>98%,标准品 RNA荧光(RiboGreen)定量检测试剂盒20

泛昔洛韦  Famciclovir  质量规格：>98.5%,BR RPE蛋白标记试剂盒(不含RPE)3(1毫克/)
宫颈上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物培养髓过氧化物酶（MPO）测定试剂盒  Ranolazine  中文名：雷诺嗪  分子式：C24H33N3O4 

酸性转化酶（AI）测试盒   可见分光光度法   50管/24样  Withanolide S  63139-16-2  中文名：醉茄内酯S  分子式：C28H40O8  度：98.0%  关键词：  南非醉茄; 睡茄交酯; 睡茄内酯; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

酸性酯酶染液   Eosinstain  4,4'-Diaminodiphenylsulfone  80-08-0  中文名：4,4'-二氨基二苯砜  分子式：C12H12N2O2S  度：98.0%   

酸性品红（复红）   5g  4,4'-Cyclohexylidenebisphenol  843-55-0  中文名：4,4'-环亚己基双苯酚  分子式：C18H20O2  度：98.0%   

酸性木聚糖酶测试盒   可见分光光度法   50管/24样  Testosterone enanthate  中文名：庚酸睾酮  分子式：C26H40O3