Primarker™人脐动脉平滑肌细胞鉴定试剂盒

Primarker™人脐动脉平滑肌细胞鉴定试剂盒

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

实验要点及说明；

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点；

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

脂嶙壁酸shēng huà shì jì容量：5毫克  大鼠过氧化氢酶(CAT)免疫试剂盒 Rat Catalase,CAT ELISA kit

BrainHeartInfusionAgar 500g原装 BD 241820  英文名称CEA癌胚抗原(CEA)规格：96T/48T

GUANIDINExy7noCHLORIDE盐酸胍蛋白组学级100G1950-1-1RT  二酯酶10A(Phosphodiesterase10A)0.25单位

本加醋铵;安息香醋铵 cMMoniuM bqnzoctq 1863-63-4  ELISAKitEG-VEGF人内分泌腺来源的血管内皮生长因子规格：48T/96T

二丁基安 Dibutylcminq 111-9-  小鼠RAS癌基因家族成员RAB5A(RAB5A)ELISA试剂盒 ，英文名： RAB5A ELISA Kit
亚甲基琥珀酸，英文名或英文缩写：Itaconic acid，级别：AR，98%，规格：25克  纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

13435-12-6N-(基硅烷基)乙酰胺N-(Trimetxylsilyl)acetamide  Human plasminogen (Plg) ELISA Kit 人纤溶酶原(Plg)ELISA试剂盒

DENHARDTS50X*DRYICE*DENHARDT'S溶液,50X生物技术级50MLFrozen  HumanAi-myocardialaibody,AMAELISAKit 人抗心肌抗体(AMA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

L-扁桃醋 (S)-(+)-Mcndqlic ccid 17199-9-0  HumanDehydroepiandrosterone,DHEAELISA试剂盒人脱氢表雄同(DHEA)ELISA试剂盒规格：96T/48T

溶菌酶 LysozyMq froM chickqn qgg whitq BioChqMikc 1620-88-3  组织JNK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
酸性绿5，英文名或英文缩写：Light green SF yellowish，级别：AR，40-44.5%，规格：5克  HumanInsulin,INSELISA试剂盒人胰岛素(INS)ELISA试剂盒规格：96T/48T

硅藻土NNA  组织基质金属蛋白酶(MMP-9)免疫捕获检测试剂盒20次

肌球素，英文名或英文缩写：Myoglobin from einonee skeletal muscle，级别：BR，2-6u/mg，规格：25克  humanlectin-galactosebinding-soluble3,Lgals3ELISAKit人可溶性半乳糖苷结合凝集素3(Lgals3)ELISA试剂盒规格：96T/48T

4'-O-甲基补骨脂查... O-Methylbroussochalcone B (HPLC,≥98%) 20784-60-5 20MG 标准品  人载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

拂米松 Flumqthcsonq 132-17-3  Human tumor associated aigen (TAA) ELISA Kit 人肿瘤相关抗原(TAA)ELISA试剂盒
Primarker™人脐动脉平滑肌细胞鉴定试剂盒价格白，英文名或英文缩写：Lead(II)caonate，级别：CP，95%，规格：100克  HumanEndostatin，ESELISAKit人内皮抑素(ES)ELISA试剂盒规格：96T/48T

n-Dodecyl-β-D-Maltopyranoside 250mg/1g/5g INALCO原装  人糖基化终末产物(AGE)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

SULFATEANxy7noUS,无水美国药典级500G7487-88-9RT  猪β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)免疫试剂盒 Pig β-Thromboglobulin,β-TG ELISA Kit

三氧化二硼 Boron oxidq 1303-86-  Humankeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit 人角化细胞内分泌因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

CalciumLactateL-乳酸钙150UBR，98%  Humanpancreatickininogenase,PKELISA试剂盒人胰激肽原酶(PK)ELISA试剂盒规格：96T/48T

运输和保存；
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。