细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）正常大鼠肾细胞；NRK培养准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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细胞名称 正常大鼠肾细胞；NRK培养
形态特性上皮样 生长特性贴壁生长 特征特性该细胞源于Osborne-Mendel大鼠的正常肾组织。 培养条件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS 传代方法1:4~1:12传代；2~3天换液1次。 传代情况P10 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测培养法（-） STR- 同工酶 染色体
注意事项：
1.一般客户拿到正常大鼠肾细胞；NRK培养后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
EB病毒转化的人B淋巴细胞(傣族);KM9403 CD59 Others Rat 大鼠 CD59 / CD59A / MAC-IP 人细胞裂解液 (阳性对照) 人子宫颈上皮细胞*培养基 100mL Yac-1细胞，小鼠淋巴瘤细胞 PA317(成纤维细胞) 人脐静脉内皮细胞;HUV-EC-C CXCL12 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (Fc 标签) Saos-2(人骨肉瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 人 Ephrin-A4 / EFNA4 人细胞裂解液 (阳性对照)
正常大鼠肾细胞；NRK培养鸡促生长激素释放激素(GHRH)ELISA 试剂盒 48T/96T 试剂盒 组装/原装 人异质性胞核核糖核蛋白G(hNP G)免疫试剂盒 Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein G,hNP G ELISA Kit 可溶性CD40配体(sCD40L)ELISA试剂盒 ，英文名： sCD40L ELISA Kit RatEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISA试剂盒大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒规格：96T/48T humandihydropyrimidinase-like3,DPYSL3ELISA试剂盒人二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)ELISA试剂盒规格：96T/48T HumanHeatShockProtein20，HSP-20ELISAKit人热休克蛋白20(HSP-20)ELISA试剂盒规格：96T/48T
冷冻保存细胞之方法：
正常大鼠肾细胞；NRK培养冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
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