大鼠小脑颗粒细胞提取物说明书

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大鼠小脑颗粒细胞提取物【Rat Brain: Normal Cerebellar Granule Cells Derivatives】

大鼠小脑颗粒细胞提取物是从大鼠原代小脑颗粒细胞提取的，大鼠原代小脑颗粒细胞从正常大鼠脑组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项：

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

雌三醇残留酶联免疫检测试剂盒Dehydroadynerigenin glucosyldigitaloside14422

及残留酶联免疫检测试剂盒Dehydroadynerigenin digitaloside526282

倍他米松残留酶联免疫检测试剂盒Deflazacort144847地夫可特

西马特罗残留酶联免疫检测试剂盒Deferasirox151地拉罗司

β-呋喃果糖苷酶酶联免疫检测试剂盒Decoquinate1879癸氧喹酯
Folic acid  59-30-3  中文名：叶酸  分子式：C19H19N7O6    兔子中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)ELISAKit              

Amprolium hydrochloride  137-88-2  中文名：盐酸氨丙林  分子式：C14H20Cl2N4    兔6前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA试剂盒  

Furosemide  54-31-9  中文名：  分子式：C12H11ClN2O5S    苏云金芽孢杆菌蛋白(BT)ELISA试剂盒  

Ethyl 3-(4-(methylamino)-3-nitro-N-(pyridin-2-yl)benzamido)propanoate  429659-01-8  中文名：  分子式：C18H20N4O5    双花扁豆凝集素(DBA)ELISA试剂盒  

8-Bromo-7-(but-2-yn-1-yl)-3-methyl-1H-purine-2,6(3H,7H)-dione  666816-98-4  中文名：  分子式：C10H9BrN4O2    蛇毒因子(CVF)ELISA试剂盒
顺苯磺阿曲库铵  Cisatracurium besilate  质量规格：>95% 大鼠P物质(SP)ELISA检测试剂盒RatSubstanceP,SPELISAKit 96T/48T

醋酸可的松  Cortisone 21-acetate  质量规格：>99%,BR,可用于细胞培养 大鼠P物质受体(SP-R)ELISA检测试剂盒RatsubstancePreceptor,SP-RELISAKit 96T/48T

醋酸可的松(标准品)  Cortisone 21-acetate  质量规格：HPLC>98%,标准品 大鼠TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)ELISA检测试剂盒RatTGF-beta-inducibleearlyresponsegene-1,TIEG1ELISAKit 96T/48T

丹曲林钠  Dantrolene    质量规格：>98.5% 大鼠Toll样受体4(TLR4)ELISA检测试剂盒RatToll-likereceptor4,TLR4ELISAKit 96T/48T

丹曲林钠(标准品)  Dantrolene    质量规格：>98%,标准品 大鼠Toll样受体9(TLR-9/CD289)ELISA检测试剂盒RatToll-likereceptor9,TLR-9ELISAkit 96T/48T

D-泛酸钙,维生素B5  D-Calcium Panthotenate(Vitamin B5)  质量规格：>98%,BR 大鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA检测试剂盒Ratα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKit 96T/48T

脱羧氯雷他定/地氯雷他定  Desloratadine  质量规格：>98% 大鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA检测试剂盒Ratα1-microglobulin,α1-MGELISAKit 96T/48T

脱羧氯雷他定/地氯雷他定(标准品)  Desloratadine  质量规格：HPLC>98%,标准品 大鼠αACTIN基因甲基化检测试剂盒20

地塞米松钠  Dexamethasone  Phosphate  质量规格：>98%,USP 大鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)ELISA检测试剂盒Ratalpha-L-fucosidase,AFUELISAKit 96T/48T

地塞米松钠（标准品）  Dexamethasone  Phosphate  质量规格：HPLC>98%,标准品 大鼠α干扰素(IFN-α)ELISA检测试剂盒RatIerferonα,IFN-αELISAKit 96T/48T
大鼠小脑颗粒细胞提取物说明书鼠疫杆菌(YP)核酸检测试剂盒   48T  3β-Hydroxyergost-5-en-7-one  156767-69-0  中文名：  分子式：C28H46O2 

噬中性及细胞活化肽 -2(NAP-2)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Testosterone isocaproate  中文名：异己酸睾酮  分子式：C25H38O3 

噬酸性粒细胞趋化因子 -2(Eotaxin-2)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  3β-Acetoxy-5α-androstan-17β-ol  3090-70-8  中文名：3-乙酰基-5α-雄烷二醇  分子式：C21H34O3  度：98.0%   

嗜酸性粒细胞阳离子蛋白   英文名称：   eosinophil cationic protein   规格：   48T/96T   英文缩写：   ECP  3β,5α-Dihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  14858-07-2  中文名：  分子式：C28H44O3  度：97.0%  关键词：  灵芝; 麦角甾烷; 对照品; 标准品; 微生物代谢产物; 天然产物; 天然产物库

嗜酸性粒细胞趋化因子 (Eotaxin)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 Biosource  3β,5α,9α-Trihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  88191-14-4  中文名：  分子式：C28H44O4  度：97.0%  关键词：  灵芝; 麦角甾烷; 对照品; 标准品; 微生物代谢产物; 天然产物; 天然产物库

注意事项：

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。