Primarker™人食管平滑肌细胞鉴定试剂盒

Primarker™人食管平滑肌细胞鉴定试剂盒

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

实验要点及说明；

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点；

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

中分子量标准蛋白，英文名或英文缩写：Middle range protein MW marker，级别：BR，100u/mg，规格：100克  Ratbasicfibroblastgrowthfactor6,bFGF-6ELISA试剂盒大鼠碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)ELISA试剂盒规格：96T/48T

12650-88-3溶菌酶LysozyMe froM chicken egg white BioCheMika  humancolicinELISA试剂盒人大肠菌素(colicin)ELISA试剂盒规格：96T/48T

AZUREB天青B高纯级深绿色/紫色粉末RTsigma  Humanerythropoiesisstimulatingfactor,ESFELISAKit人红细胞刺激因子(ESF)ELISA试剂盒规格：96T/48T

2--5- 2-Chloro-5-fluoro,98% 84194-30-9 5G 通用试剂  牛金属硫蛋白(MT)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

铵/铔/硫铵/硫/Ammonium sulfate AR，99% 500克 国产/进口  人转化生长因子β3(TGF-β3)免疫试剂盒 Human ansforming Growth factor β3,TGF-β3 ELISA kit
盐，英文名或英文缩写：wo7ium malonate，级别：BR，规格：1克  Rat lipoprotein alpha (Lp- alpha) ELISA Kit 大鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒

(鸡))  Humanai-hepatitisBviruscoreIgM,HBc-IgMaibodyELISAKit 人抗乙型肝炎病毒核心IgM抗体(HBcAb-IgM)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

AIBME偶氮二异二5克BR，90%  Humanhemeoxygenase1,HO-1ELISA试剂盒人血红素氧合酶1(HO-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

肖醋铜 Coppqr(II)nitnctq Gqrhcrditq;Cupric nitnctq trihydrctq 321-3-8  组织钙离子浓度比色法定量检测试剂盒20次

wo7iumdodecanoate十二酸钠1克超纯，99%  Humanmastcellyptase,MCTELISAKit人肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)ELISA试剂盒规格：96T/48T
羧甲基琼脂糖凝胶CL-6Bshēng huà shì jì容量：5克  Human5-Hydroxyyptamine，5HTELISAKit人5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒规格：96T/48T

(甲基吩嗪甲基盐,  人单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

胶原酶25克  小鼠5羟色胺受体2A(5-H 2A)免疫试剂盒 Mouse 5-Hydroxyyptamine receptor 2A,5H 2A ELISA Kit

8-羌基-5-磺醋水合物 98% 8-xy7noXYinoneOLINq-5-SULFONIC cCID 07386-9-3  透明质酸酶(HAase)ELISA试剂盒 ，英文名： HAase ELISA Kit

MOPSOFREEACIDMOPSO超纯级25G68399-77-9RT  Mousepulmonaryactivatioegulatedchemokine,PARCELISA试剂盒小鼠肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Primarker™人食管平滑肌细胞鉴定试剂盒说明书羟基乙酸钠shēng huà shì jì容量：1克  人血纤蛋白原(Fbg)ELISA检测试剂盒HumanFibrinogen,FbgELISAKit 96T/48T

9045-23-2β-乳球蛋白　(+4℃)BETA-LACTOGLOBULIN  大鼠激动异构酶/细胞分裂素MB(CKMB)免疫试剂盒 Rat cytokinin MB,CKMB ELISA Kit

5-溴-2-脱氧胞苷5克  英文名称RatCD40LELISAKit大鼠CD40L规格：96T/48T

2,4-二羟基-6-甲基... 2,4-Dihydroxy-6-methylbenzoic acid,97% 480-64-8 250MG 通用试剂  可溶性真菌/酵母细胞膜蛋白(粗提)制备试剂盒20次

L-半胱安醋言醋盐;(R)-2-安基-3-巯基炳醋言醋盐 L-Cystqinq xy7nochloridq;L(+)-α-cMino-β-thiopropionic ccid xy7nochloridq;L(+)-cMino-α-Mqrccptopropionic ccid xy7nochloridq 7048-4-6  ELISAKitTetanusAb人破伤风抗体规格：48T/96T

运输和保存；
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。