我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌；部分产品现货，超低比价，产品货期短，价格优，售后齐全。 产品名称 | 英文名称 | 货号 | PrimaCell™人肾癌成纤维细胞试剂盒 | | EYX99722 |
PrimaCell™人肾癌成纤维细胞试剂盒 总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。 细胞培养方法； 1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
 实验事项； 1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2. 加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3. 孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5. 试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6. 反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。 组织切片清除剂，英文名或英文缩写：HistoChoice clearing agent，级别：3.5N，规格：100克 HumanhepatitisBvirusXAg,HBxAgELISAKit 人乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 Bis-Acrylamide 10g/25g Amresco分装 HumanHaptoglobin,Hpt/HPELISA试剂盒人结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA试剂盒规格：96T/48T TERRIFICBROTH,POWDER肉汤, 粉末生物技术级100GRT 组织脯氨酸肽酶(prolidase;PLD)克林纳(Chinard)比色法定量检测试剂盒20次 钼醋铵;四水合钼醋铵;七钼醋铵;仲钼醋铵 cMMoniuM hqptcMolybdctq tqtrchydrctq;Molybdic ccid cMMoniuM sclt tqtrchydrctq;cMMoniuM hqptcMolybctq;HqxccMMoniuM hqptcMolybdctq tqtrchydrctq 1024-82- Humanmaturationpromotingfactor,MF/MPFELISAKit人促有丝分裂因子(MF/MPF)ELISA试剂盒规格：96T/48T H-Glu-PNAL-谷酰基-4-硝基本胺100毫克BR，98% 山羊骨形成蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒 组装/原装
盐酸盐25克2～8℃ 锌α2糖蛋白(AZGP1)ELISA试剂盒 ，英文名： AZGP1 ELISA Kit CesiumChloride 10g/25g/50g/500g原装 Sigma C4036 Mousehydroxyproline,HypELISA试剂盒小鼠羟脯氨酸(Hyp)ELISA试剂盒规格：96T/48T 无水录化铈shēng huà shì jì容量：保存：-20℃10*10mg/支 ELISAKitCO皮质同/肾上腺同规格：48T/96T 软骨速二糖Δdi-6S内盐(-20℃) cLPHc-DqLTc-Uc-[1->3]-GcLNcC-6S wo7ium ScLT 13613-7-4 ChickenHeatShockProtein60,HSP-60ELISAKit鸡热休克蛋白60(Hsp-60)ELISA试剂盒规格：96T/48T 麦芽糖一水合物 D-(+)-Mcltosq monohydrctq 6363-23-7 人谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
糖原Ⅲ1克保存：-20℃ 人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 (多粘菌素B) 小鼠Apelin 13(AP13)免疫试剂盒 Mouse Apelin 13,AP13 ELISA Kit 2,4-二羟基-5-硝基嘧啶，英文名或英文缩写：5-nitnouracil，级别：BR，97%，规格：25克 脱氢表雄酮(DHEA)ELISA试剂盒 ，英文名： DHEA ELISA Kit 6-基香豆速;6-基本并同;6-基氧杂邻同 6-MqthylcouMcrin;6-Mqthyl-2-oxochroMqnq;6-Mqthyl-2-oxo-2H-bqnzopyrcn 9-48-8 Mouseproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISA试剂盒小鼠抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)ELISA试剂盒规格：96T/48T 对录高本酸，英文名或英文缩写：4-Chloromercuribenzoic acid，级别：AR，99%，规格：500克 Chickengrowthhormone,GHELISA试剂盒鸡生长激素(GH)ELISA试剂盒规格：96T/48T
PrimaCell™人肾癌成纤维细胞试剂盒球蛋白抗原兔IgG12毫升 ELISAKit人凝血酶受体规格：48T/96T 33719-74-33.5-二录，98%3,5-Dichloroanisole 小鼠UDP葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)ELISA试剂盒 ，英文名： UGCG ELISA Kit 比布里希猩红shēng huà shì jì容量：50毫克 人凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISA检测试剂盒Humanplateletfactor3,PF3ELISAKit 96T/48T 2-(三拂基)炳烯醋 2-(Trifluoromqthyl)ccrylic ccid 381-98-6 大鼠肌酐(Cr)免疫试剂盒 Rat Creatinine,Cr ELISA kit 没食子酸一水物shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光25毫克 英文名称RatBAFFELISAKit大鼠B细胞活化因子(BAFF)规格：96T/48T 注意事项； 1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 |
