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人肺大动脉内皮细胞提取物培养

人肺大动脉内皮细胞提取物培养
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公司细胞现货供应,人肺大动脉内皮细胞提取物培养质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
  人肺大动脉内皮细胞提取物培养的详细资料:

我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌;部分产品现货,超低比价,产品名称货期短,价格优,售后齐全。

产品名称

英文名称

货号

人肺大动脉内皮细胞提取物培养

Human Lung: Normal Pulmonary Endothelial cell Derivatives

EYX99001

 

人肺大动脉内皮细胞提取物【Human Lung: Normal Pulmonary Endothelial cell Derivatives

人肺大动脉内皮细胞提取物是从人原代肺大动脉内皮细胞提取的,人原代肺大动脉内皮细胞从正常人肺大动脉内皮组织制备。正常人肺大动脉内皮组织采集自各地方医院,采集工作根据IRB HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。
蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。 

细胞培养方法:

1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项:

1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
2.   加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的“预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。

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非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测试剂盒Physcion5211大黄素
Phenformin  114-86-3  中文名:苯乙双胍  分子式:C10H15N5  度:98.0%  关键词:    小鼠紧张素转化酶   英文名称:   Angiotensin Conveing Enzyme   规格:   48T/96T   英文缩写:   ACE

Perospirone hydrochloride  129273-38-7  中文名:盐酸哌罗匹隆  分子式:C23H31ClN4O2S  度:98.0%  关键词:    小鼠雄激素结合蛋白   英文名称:   Androgen Binding Protein   规格:   48T/96T   英文缩写:   ABP

Periplogenin  514-39-6  中文名:杠柳苷元  分子式:C23H34O5  度:98.0%  关键词:    小鼠促上腺皮质激素   英文名称:   Adrenocor Ticoopic Hormore   规格:   48T/96T   英文缩写:   ACTH

Periplocoside O  116709-67-2  中文名:北五加皮苷分子式:C36H56O10  度:98.0%  关键词:  抗肿瘤; 杠柳; 孕甾烷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠半胱天冬蛋白酶-3   英文名称:   cysteine-aspaic acid protease-3   规格:   48T/96T   英文缩写:   Active Caspase-3

Periplocoside N  39946-41-3  中文名:  分子式:C27H44O6  度:98.0%  关键词:    小鼠紧张素原(aGT)ELISA试剂盒
重楼皂苷B HPLC98% 20mg RatCaspase3,Casp-3ELISAKit大鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA试剂盒规格:96T/48T

重楼皂苷H HPLC98% 20mg RatCaspase-9,Casp-9ELISAKit大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA试剂盒规格:96T/48T

原皂苷Pa HPLC98% 20mg Ratcatecholamine,CAELISAKit大鼠儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒规格:96T/48T

原皂苷Pb HPLC98% 20mg RatCathepsinK,cath-KELISAKit大鼠组织蛋白酶K(cath-K)ELISA试剂盒规格:96T/48T

伪原皂苷Pa HPLC98% 20mg RatCaveolin-1,Cav-1ELISAKit大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T

偏诺皂苷元 HPLC98% 20mg Ratc-fosELISAKit大鼠c-fosELISA试剂盒规格:96T/48T

醉鱼草皂苷IVb HPLC98% 20mg RatCholecystokinin,CCKELISAKit大鼠胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)ELISA试剂盒规格:96T/48T

,,'三羟基甲基二氢黄酮 HPLC98% 20mg RatCholecystokinin,CCKELISA试剂盒大鼠胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)ELISA试剂盒规格:96T/48T

苦玄参苷IB HPLC98% 20mg Ratcholesterol,CHELISAKit大鼠胆(CH)ELISA试剂盒规格:96T/48T

硫酸天仙子胺水合物 HPLC98% 20mg Ratcholesterol,CHELISA试剂盒大鼠胆(CH)ELISA试剂盒规格:96T/48T
人肺大动脉内皮细胞提取物培养中文名:枸橼酸  分子式:C28H38N6O11S    植物类黄测试盒   可见分光光度法   50/24

Sibiricose A1  中文名:6'-芥子酰基蔗糖  分子式:C23H32O15    植物总酚测试盒   可见分光光度法   50/24

Shiraiachrome A  中文名:  分子式:C30H26O10    植物原测试盒   可见分光光度法   50/24

Shikonin  中文名:紫草素  分子式:C16H16O5    尿酸含量测试盒   可见分光光度法   50/48           

Shikimic acid  中文名:莽草酸  分子式:C7H10O5    植物酸甲酯(MeJAELISA试剂盒

注意事项:

1. 接收到,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。 

 

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