PrimaCell™大鼠脑膜成纤维细胞试剂盒说明

PrimaCell™大鼠脑膜成纤维细胞试剂盒

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

实验要点及说明；

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点；

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

载玻片细胞组蛋白NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20  13241-33-3新橙皮苷说明书  Neohesperidin

Mousealpha-fetoproteinLensculinarisaggliin2,AFP-L2ELISA试剂盒小鼠小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)ELISA试剂盒规格：96T/48T  13241-28-6大黄酚-8-O-葡萄糖苷品牌  Chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside

小鼠载脂蛋白A4(APOA4)ELISA试剂盒 ，英文名： APOA4 ELISA Kit  三七总皂苷规格  Panax notoginsenosides

巨噬细胞移动抑制因子(MIF)ELISA检测试剂盒MonkeyMacrophageMigrationInhibitoryFactor,MIFELISAKit 96T/48T  133-05-1细辛脂素  Asarinin

犬甲状腺素(T4)试剂盒 Canine thyroxine,T4 ELISA Kit  126-17-0澳洲茄胺说明书  Solasodine
15291-75-5银杏内酯A规格  Ginkgolide A  英文名称RatHIF-1αELISAKit大鼠低氧诱导因子-1α(HIF-1α)规格：96T/48T

152743-19-6石吊兰素品牌  Lysionotin  英文名称RatHIF-1αELISAKit大鼠低氧诱导因子-1α(HIF-1α)规格：96T/48T

152743-19-6石吊兰甲素品牌  Lysionotin   英文名称Rathemeoxygenase-2ELISAKit大鼠血红素氧合酶2(HO-2)规格：96T/48T

14937-32-71,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖品牌  1,2,3,4,6-pentagalloylglucose   英文名称Rathemeoxygenase-2ELISAKit大鼠血红素氧合酶2(HO-2)规格：96T/48T

14937-32-71,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖品牌  1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose   英文名称Rathemeoxygenase-1ELISAKit大鼠血红素氧合酶1(HO-1)规格：96T/48T
英文名称HumanangiotensinogenELISAKit人血管紧张素原(aGT)规格：96T/48T  69659-80-9丹参酮IIA-磺酸钠品牌  Tanshinone IIA-sulfonic 

化线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒20/200  53452-16-7王不留行黄酮苷规格  Vaccarin

RatIerferonβ,IFN-β/IFNBELISA试剂盒大鼠β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA试剂盒规格：96T/48T  94987-08-3绞股蓝皂苷  Stevenleaf

小鼠原钙黏素15(PCDH15)ELISA试剂盒 ，英文名： PCDH15 ELISA Kit  6024-85-7延胡索乙素说明书  Tetrahydropalmatine

猴载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA检测试剂盒MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 96T/48T  6080-33-7盐酸青藤碱品牌  Sinomenine
PrimaCell™大鼠脑膜成纤维细胞试剂盒说明书81-54-9羟基茜草素品牌  Purpurin   组织CDK2/CYCLINA激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20

81525-13-5连翘脂苷B品牌  Forsythoside B  组织CASEINKINASE1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20

81-27-6番泻苷A品牌  Sennoside A   组织CASEINKINASE1δ激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20

80952-72-3（R型）人参皂苷Rg2品牌  20(R)Ginsenoside Rg2   组织BTK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20

80952-72-3(R型)人参皂苷Rg2  20(R)Ginsenoside Rg2   组织B-RAF激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20

运输和保存；
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。