PrimaCell™小鼠肺泡上皮细胞试剂盒培养

PrimaCell™小鼠肺泡上皮细胞试剂盒

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

实验要点及说明；

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点；

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

Rat1,3-βDglucosidase,1,3-βD-GluELISAKit大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA试剂盒规格：96T/48T  54522-52-0甲基原薯蓣皂苷  Methyl protodioscin

载玻片细胞INSULIN蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20  77-60-1剑麻皂苷元说明书  Tigogenin

Humanγ-glamylsysteinesyhetase,γ-ECSELISA试剂盒人γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)ELISA试剂盒规格：96T/48T  458-37-7姜黄素品牌  Curcumin

小鼠主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISA试剂盒 ，英文名： MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ ELISA Kit  122-48-5姜酮规格  Zingerone

小鼠抗酸酸性1酸酶5b(ACP-5b)ELISA检测试剂盒Mousetarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit 96T/48T  94987-08-3绞股蓝皂苷XLIX  Gypenoside XLIX
552-66-9大豆苷品牌  Daidzin   猪血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1)试剂盒 Porcine Vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1 ELISA Kit

552-59-0樱黄素说明书  Prunetin  猪血管内皮细胞生长因子(VEGF)试剂盒 Pig Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA KIT

552-59-0樱黄素  Prunetin  猪血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)试剂盒 Pig Vascular Endothelial-Cadherin Complex,VE-cad ELISA Kit

552-58-9圣草酚说明书  Eriodictyol   猪血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)ELISA检测试剂盒PorcineVascularEndothelial-CadherinComplex,VE-cadELISAKit 96T/48T

552-58-9圣草酚说明书  Eriodictyol  猪血管紧张素转化酶2(ACE2)试剂盒 Pig Angiotensin conveing enzyme 2,ACE2 ELISA Kit
犬β内啡肽(β-EP)ELISA检测试剂盒CanineBeta-Endorphin,β-EPELISAKit 96T/48T  104-46-1反式茴香脑品牌  Anethole

犬胸腺肽α1(Thymosin α1)试剂盒 Canine Thymosin α1 ELISA Kit  33889-68-8防己诺林碱规格  Fangchinoline

英文名称HumaissuefactorELISAKit人组织因子(TF)ELISA试剂盒规格：96T/48T  518-34-3粉防己碱  Tetrandrine

超敏型HRP-TMB底物显色试剂盒10/50  19906-72-0蜂斗菜内酯说明书  Bakkenolide

Ratglucocoicoid,GCELISA试剂盒大鼠内源性糖皮质激素(GC)ELISA试剂盒规格：96T/48T  484-20-8佛手柑内酯品牌  Bergapten；5-Methoxypsoralen
PrimaCell™小鼠肺泡上皮细胞试剂盒培养3,6′-二芥子酰基蔗糖品牌  3, 6′-Disinapoyl Sucrose   英文名称谷氨酸脱羧酶抗体规格：96T/48T

3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黄酮规格  3,5,6,7,8,3’,4’-heptemthoxyflavone   英文名称U.S.Salmon.CT.ELISAKit超级鲑鱼(U.S.Salmon.CT.)规格：96T/48T

29956-99-8氯化天竺葵素  Di-tert-octyl Disulfide    英文名称TIMP-1金属蛋白酶组织抑制因子-1规格：96T/48T

299-39-8硫酸司巴丁  Sparteine sulfate   英文名称ThromboxaneB2人血栓素(TXB2)规格：96T/48T

29883-15-6苦杏仁苷说明书  Amygdalin  英文名称TGF-β1转移生长因子-β1规格：96T/48T

运输和保存；
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。