(一)血液细胞的取材 血液及淋巴组织中的血细胞、淋巴细胞的取材,一般多抽取静脉外周血,ELISA试剂盒或从淋巴组织中(如脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等)分离细胞,取材时应注意抗凝,通常采用肝素抗凝,常用肝素浓度为8~10u/mL血,抽血的针筒也要用肝素湿润,若从血站取来的献血员的血液,因血站不用肝素抗凝剂,常用含枸椽酸盐抗凝,对此类血标本千万不能用含钙、镁离子的洗液来处理细胞,因此时的钙、镁离子可加速血液中凝血酶促进血液凝固而影响收获血细胞及淋巴细胞。此外要严格无菌,尽量新鲜使用。 (二)骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材 取上述标本时,除严格无菌,注意抗凝外,ELISA试剂盒还要尽快分离培养,一般无需其他处理,离心后,用无钙、镁PBS洗两次,再用培养液洗一次后即可培养,不宜低温存放。具体操作详见后面有关章节。 (三)动物组织取材 1、鼠胚组织取材 首先用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物,然后将其整个浸泡在含有75%酒精的烧杯中,5分钟后(注意时间不能太长,以避免酒精从口或其他通道进入体内,影响组织活力),取出动物,在消毒过的木板上可用无菌的图钉或大头针固定四肢,切开皮肤,用无菌操作法解剖取胚或用无菌止血钳挟起皮肤、用无菌眼科剪沿躯干中部环形剪开皮肤,用止血钳分别挟住两侧皮肤拉向头尾,把动物反包,暴露躯干,然后再固定,更换无菌解剖器材,采用无菌操作法解剖取出胚胎。 2、幼鼠胚肾(或肺)取材 ELISA试剂盒 幼鼠采用上述方法处死消毒后,腹部朝上固定在木板上,先切开游离毛皮并拉开至两侧:然后采用无菌法打开胸腔取肺,或背部朝上固定在木板上,先将背部毛皮切开游离并拉向两侧,然后采用无菌法从背部打开腹腔取肾。
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