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DAB显色和苏木素复染时间
点击次数:1343 更新时间:2015-07-08

DAB显色和苏木素复染时间
DAB显色以镜下出现棕黄色颗粒为准,具体时间依DAB浓度和其他因素而不同,切记当镜下出现棕黄色颗粒后应及时终止显色,否则背景也是一片黄色,影响染色结果判断。苏木素复染时间虽然对染色结果判断影响不大,但如果想有漂亮的免疫组化图片,也应该掌握苏木素复染的技巧。我的经验是复染30-60s,然后用0.1%盐酸酒精分化约5-10s。ELISA试剂盒

需要说明的是,因为DAB和苏木素制剂不同,显色和复染的时间需根据实验结果不断调整。

适当的PBS冲洗可使染色背景更加清晰,建议在冲洗一抗的时候先用0.1%Tween20-PBS(0.5ml Tween20用PBS定容至500ml),然后PBS冲洗两遍。此外,对于定位于核或核膜的抗原,可在孵育一抗是加入Triton,Triton可穿透核膜,起到一个“打孔机"的作用,有利于抗体和抗原的结合。还有一点一定要注意的是,实验过程中切片切勿干燥,如果切片干了,这张片子就报废了!

免疫组化看似简单但要想染的漂亮却不容易,ELISA试剂盒我知道的几个做的都抱怨以后再也不想做免疫组化了。

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