在什么情况下使用Triton-X100 (1)Triton X-100化学名称为聚乙二醇辛基苯基醚,是一种去污剂。在免疫组织化学(>10um厚切片) 和免疫细胞化学中一般用Triton X-100 作为细胞通透剂,在膜上打孔。 (2)其作用原理:Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内,故在细胞免疫组化时尤为推荐使用,这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。 (3)Triton X-100既是一种表面活性剂,也有抗氧化作用。 封闭血清的选择原则是什么? (1)膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体,造成后续结果的假阳性! (2)封闭血清一般是和二抗同一来源的,血清中动物自身的抗体,预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合,否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合,会造成背景。 (3)也可以用小牛血清、BSA、羊血清等,但不能与一抗来源一致。 抗体孵育条件的比较? (1)一抗孵育温度有几种:4度、室温、37度,其中4度效果*;孵育时间:这与温度、抗体浓度有关,一般37度1-2h,而4度过夜和从冰箱拿出后37度复温45min。 (2)二抗一般室温或37度30min-1h,具体时间需要摸索。细胞 |