(一)原理

    白介素一6(interleukin一6，IL一6)在体外能促进B细胞杂交瘤的生长，故又称为杂交瘤生长因子(HGF)。小鼠B细胞杂交瘤细胞只有在IL一6存在的培养基中才能生长，可以作为指示细胞来测定待检样品中IL-6水平。这类IL一6依赖的小鼠B细胞杂交瘤细胞系有MH60·BSF2、B9、7TDl、KD823等，其中以MH60·BSF2细胞使用zui多。

(二)材料

1．IL-6待测样品，用10％FCS RPMI 1640培养液倍比稀释。2．IL一6标准品。

3．IL一6依赖的MH60·BSF2细胞系。

4．10％FCS RPMI l 640培养液。

5．MTT(5μg／ml溶于PBS)。

6．酸性异丙醇或二甲基亚砜(DMSO)。

7．酶标仪。

(三)方法

1．取对数生长期的MH60·BSF2细胞，重悬于培养液中。

2．将待测样本和标准品IL一6倍比稀释，分别加入96孔培养板中，每孔加入100μl.

3．将悬浮细胞离心弃上清液，配成2×105／ml细胞，加入100μ1于各孔中。

4．37℃、5％CO2孵箱中培养481-l后，加MTT(5mg／m1)，每孔20μl，继续培养4 h。

5．离心弃上清液，加酸化异丙醇溶液(O．04 mol／L)，每孔200μl，吹打混匀后在酶标仪上测OD值，计算IL一6活性单位。

(四)结果分析

以OD值对IL一6标准品稀释倍数的对数作标准曲线。测得样品的OD值后，从标准曲线即可得出样品IL一6的含量。

(五)注意事项

1．细胞洗涤要充分、轻柔，每次弃洗涤上清液力求*。

2．为了增加检测方法的敏感性，可采用新复苏MH60·BSF2细胞。