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人磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)elisa试剂盒​操作步骤
点击次数:112 发布时间:2022-09-01

人磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)elisa试剂盒操作步骤:


1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7. 温育:操作同3。

8. 洗涤:操作同5。

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟。

防御素β126(DEFβ126)重组蛋白

防御素β131(DEFβ131)重组蛋白

防御素β2(DEFβ2)重组蛋白

分泌跨膜蛋白1(SECTM1)重组蛋白

封闭蛋白9(CLDN9)重组蛋白

脯氨酰羧肽酶(PRCP)重组蛋白

辅肌动蛋白α2(ACTN2)重组蛋白

辅肌动蛋白α3(ACTN3)重组蛋白

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱγ(CAMK2γ)重组蛋白

钙非依赖性磷脂酶A2(iPLA2)重组蛋白

钙结合蛋白(CR)重组蛋白

钙联蛋白(CNX)重组蛋白

钙黏蛋白26(CDH26)重组蛋白

干扰素α(IFNα)重组蛋白

干扰素α2(IFNα2)重组蛋白

干扰素α4(IFNα4)重组蛋白

干扰素γ(IFNγ)重组蛋白

干扰素诱导内质网关联病毒抑制蛋白(Viperin)重组蛋白

干细胞因子(SCF)重组蛋白

甘丙肽(GAL)重组蛋白



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