为了避免反复冻融导致蛋白降解、聚集或活性丧失，最核心的原则是“按需分装，一次一管"。

以下是标准的蛋白样品分装与保存流程，适用于 Western Blot (WB)、ELISA 或其他生化实验的样品制备：

分装前的准备工作

在进行分装之前，必须确保样品的均一性和完整性。

充分混匀： 在分装前，将提取好的总蛋白样品轻轻吹打混匀或涡旋振荡（注意不要产生过多气泡），确保蛋白浓度在整管溶液中是均一的。

测定浓度： 此时是测定蛋白浓度的最佳时机（如使用 BCA 法）。一旦分装冻存后，再想测定浓度就需要解冻整管，违背了分装的初衷。

加入保护剂（可选但推荐）：

甘油： 如果样品需要频繁取用，可以在样品中加入甘油至终浓度为 10%-20%。甘油可以降低溶液的冰点，防止样品冻结成硬块，便于在 -20℃ 下直接吸取（如果是 -80℃ 则通常会冻实）。

蛋白酶抑制剂： 确保在裂解时已加入足量的 PMSF 或其他抑制剂。

分装的具体操作

这是避免反复冻融的关键步骤。

确定分装体积：

根据你每次实验（如一次 WB 电泳）所需的蛋白量来决定分装体积。

建议体积： 通常分装为 10 µL - 30 µL 一管。这个体积通常足够跑 1-2 块胶，避免了一次用不完剩下的尴尬。

计算公式： 分装体积 = (单次上样量 µg / 样品浓度 µg/µL) × (1 + 损耗余量)。例如，每次需 30µg，浓度为 3µg/µL，则需 10µL。建议分装 15-20µL 以预留移液损耗。

选择耗材：

使用 0.2 mL 或 0.5 mL 的 PCR 管（薄壁管）或 1.5 mL 低吸附离心管。

低吸附管非常重要，因为微量蛋白容易吸附在普通管壁上，导致回收率降低。

快速分装：

将蛋白样品快速、准确地分装到各个小管中。

标记清楚： 在管盖和管壁上用耐低温记号笔标记样品名称、浓度、日期（如：Liver-3.5ug-ul-231027）

 保存与冻存

速冻： 分装好后，立即将样品管放入 液氮 或 干冰/乙醇 混合物中速冻，然后转移至 -80℃ 冰箱 长期保存。

注意：如果没有液氮，直接放入 -80℃ 也可以，但速冻能减少冰晶形成，对蛋白结构保护更好。

温度选择：

长期保存（>1个月）： 必须保存在 -80℃。

短期保存（<2周）： 可以保存在 -20℃，但需确保冰箱温度稳定，无频繁除霜。

使用与解冻规范

即使分装了，如果使用不当，依然会造成浪费。

“一次性"原则： 从 -80℃ 取出一管后，用完即弃（或仅保留剩余部分用于当天的后续实验，当天结束后丢弃）。绝对不要将解冻过的样品重新放回 -80℃ 保存。

冰上解冻： 实验当天，将所需数量的样品管从 -80℃ 取出，立即置于 冰上 缓慢解冻。

再次混匀与离心：

解冻后，蛋白可能会发生轻微沉淀或分层。

必须涡旋振荡 混匀。

必须低温离心： 在 4℃ 下，12,000 rpm 离心 10-15 分钟。这一步是为了去除可能形成的蛋白聚集体或细胞碎片，取上清液进行后续的上样缓冲液混合。