细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)人张氏肝细胞;Chang liver价格准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 产品描述: 细胞名称 人张氏肝细胞;Chang liver价格 形态特性上皮细胞样 生长特性贴壁生长 特征特性张氏肝细胞1954年从非恶性的人体组织中建立。广泛应用于病毒学、生化和恶性肿瘤相关的转移研究。 培养条件RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清,10% 传代方法消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。 传代情况PN5 冻存条件*培养基+8%DMSO 支原体检测阴性 STR 同工酶 染色体
注意事项: 1.一般客户拿到人张氏肝细胞;Chang liver价格后,应该注意什么? 客户收到细胞先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞时的培养基拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。 收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。 细胞出现问题,不予以重发的情况有哪些? (1)客户造成细胞污染,不重发; (2)客户不正确操作致细胞状态不好,不重发; (3)非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发; (4)细胞状态不好,未提供细胞培养前3天照片的,不重发; (5)细胞培养时经其它处理的,不重发; (6)细胞收到2天内,未告知,不重发; (7)视具体情况而定。 TF*小鼠组织因子规格48T/96T t-PA*小鼠组织型纤溶酶原激活剂规格48T/96T TPA*小鼠组织多肽抗原规格48T/96T HD*小鼠组织蛋白去乙酰化酶规格48T/96T cath-K*小鼠组织蛋白酶K规格48T/96T histon-H2b*小鼠组蛋白H2b规格48T/96T HIS*小鼠组胺规格48T/96T TFR/CD71*小鼠转铁蛋白受体规格48T/96T TGFβ2*小鼠转化生长因子β2规格48T/96T TGF-β1*小鼠转化生长因子β1规格48T/96T 人张氏肝细胞;Chang liver价格抗原ATEXPA10peptide植物扩张蛋白ATEXPA10(拟南芥)抗原0.5mgATEXPA10peptide植物扩张蛋白ATEXPA10(拟南芥 活化复制因子1ATF1(ActivatingTranscriptionFactor1)活化复制因子10.5mgATF1(ActivatingTranscriptionFactor1 ATF2(ActivatingTranscriptionFactor2)活化复制因子2(多肽)0.5mgATF2(ActivatingTranscriptionFactor2 活化转录因子3抗原ATF3(ActivatingTranscriptionFactor3)活化转录因子3抗原0.5mgATF3(ActivatingTranscriptionFactor3 活化转录因子6抗原ATF6(activatingtranscriptionfactor6)活化转录因子6抗原0.5mgATF6(activatingtranscriptionfactor6 毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白抗原ATM(ataxiatelangiectasiamutated)毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白抗原0.5mgATM(ataxiatelangiectasiamutated 钠钾ATP酶通道蛋白抗原ATP1b2/Na+K+ATPase(ATPase,Na+/K+transporting,beta2polypeptide)钠钾ATP酶通道蛋白抗原0.5mgATP1b2/Na+K+ATPase(ATPase,Na+/K+transporting,beta2polypeptide AU1tagpeptideAU1tag标签多肽AU1tagpeptideAU1tag标签多肽0.5mgAU1tagpeptideAU1tag标签多肽 冷冻保存细胞之方法: 人张氏肝细胞;Chang liver价格冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。 冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 |