细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）人肝永生化细胞；THLE-3说明书准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
产品描述：
细胞名称 人肝永生化细胞；THLE-3说明书
形态特性上皮细胞 生长特性贴壁生长 特征特性THLE-2(ATCCCRL-10149和THLE-3(ATCCCRL-11233)细胞系是正常肝细胞用SV40大T抗原转染得到。将含有SV40T抗原的BglI-HpaI片段的逆转录病毒载体导入兼嗜性包装细胞株PA317中病毒。THLE-2andTHLE-3表达正常肝上皮细胞特征性的表型。当注射到无胸腺裸鼠中时，它们不成瘤，具有接近二倍体的核型，不表达甲胎蛋白。THLE-2andTHLE-3将benzo[a]pyrene,N-nitrosodimet 培养条件CloneticsCorporation,Walkersville,MD21793的BEGM培养基(目录号CC3170)。套装包含了500毫升基本培养基及分别冻存的添加剂，我们不用其中的GA和Epinephrine但另外添加了5ng/mlEGF,70ng/mlPhosphoethanolamine。 传代方法消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。 传代情况PN5 冻存条件*培养基+8%DMSO 支原体检测阴性 STR 同工酶 染色体
注意事项：
1.一般客户拿到人肝永生化细胞；THLE-3说明书后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌；部分产品现货，超低比价，人肝永生化细胞；THLE-3说明书货期短，价格优，售后齐全。点击进入了解更多转化细胞。 hs-CRP*兔超敏C反应蛋白规格48T/96T C3*兔补体蛋白3规格48T/96T PY*兔吡啶交联物规格48T/96T Cys-C*兔半胱氨酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C规格48T/96T IL-17*兔白介素17规格48T/96T ADR*兔阿霉素规格48T/96T Aβ1-40*兔β淀粉样蛋白1-40规格48T/96T p53*兔p53规格48T/96T BAX*兔Bcl-2相关X蛋白规格48T/96T 8-epi-PGF2α*兔8-异构前列腺素规格48T/96T
人肝永生化细胞；THLE-3说明书IntegrinalphaV巨噬细胞来源的趋化因子αV多肽IntegrinalphaV巨噬细胞来源的趋化因子αV多肽0.5mgIntegrinalphaV巨噬细胞来源的趋化因子αV多肽 IntegrinalphaV/CD51peptide整合素αV抗原IntegrinalphaV/CD51peptide整合素αV抗原0.5mgIntegrinalphaV/CD51peptide整合素αV抗原 IntegrinAlpha3整合素α3抗原IntegrinAlpha3整合素α3抗原0.5mgIntegrinAlpha3整合素α3抗原 整合素α4β7抗原IntegrinAlpha4Beta7/LPAM-1(LymphocytePeyer’spatchAdhesionMolecule1/Integrinalpha4,beta7)整合素α4β7抗原0.5mgIntegrinAlpha4Beta7/LPAM-1(LymphocytePeyer’spatchAdhesionMolecule1/Integrinalpha4,beta7 粘附分子整合素α5抗原IntegrinAlpha5(ITG-AlphaV/CD49e)粘附分子整合素α5抗原0.5mgIntegrinAlpha5(ITG-AlphaV/CD49e IntegrinAlphaE2/CD103整合素αE2抗原IntegrinAlphaE2/CD103整合素αE2抗原0.2mlIntegrinAlphaE2/CD103整合素αE2抗原 IntegrinBetachain(ITG-Beta3/ITGB3)整合素-β3（抗原）0.5mgIntegrinBetachain(ITG-Beta3/ITGB3 粘附分子整合素β1抗原integrinBeta1(ITG-Beta1/CD29)粘附分子整合素β1抗原0.5mgintegrinBeta1(ITG-Beta1/CD29
冷冻保存细胞之方法：
人肝永生化细胞；THLE-3说明书冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 |
