细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）SV40转染人成骨细胞；hFOB 1.19培养准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
产品描述：
细胞名称 SV40转染人成骨细胞；hFOB 1.19培养
形态特性多角 生长特性贴壁生长 特征特性在0.6mg/ml新霉素G418存在下，用温度敏感的表达载体pUCSVisA58转染自然的胎儿四肢组织，建立了此细胞系。在许可温度33.5oC下细胞分裂很快，而在限制温度39.5oC下细胞极少分裂或不分裂。这些细胞具有分化为表达造骨细胞表型的成熟造骨细胞的能力。这些细胞提供了一个同质化的快速增殖模型系统，用于研究正常人造骨细胞的分化，造骨细胞生理和激素，生长因子，和对造骨细胞的功能及分化有影响的细胞因子。 培养条件DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS+300ng/mlG418 传代方法1:2传代，3天传代一次 传代情况 冻存条件基础培养基+8%DMSO+39%FBS 支原体检测培养法（-） STRAmelogenin：X；CSF1PO:10,13；D12S391:20,23；D13S317:11,12；D16S539:9,13；D18S51:10,17；D19S433:13,15；D21S11:29,32.2；D2S1338:23,24；D3S1358:17,18；D5S818:11,12；D6S1043:13,16；D7S820:8,10；D8S1179:10,14；FGA:19,22；PentaE:8,11；TH01:7,9.3；TPOX:11；vWA:16,18； 同工酶 染色体
注意事项：
1.一般客户拿到SV40转染人成骨细胞；hFOB 1.19培养后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌；部分产品现货，超低比价，SV40转染人成骨细胞；hFOB 1.19培养货期短，价格优，售后齐全。点击进入了解更多转化细胞。 RAG-2*人重组激活基因2规格48T/96T RAG-1*人重组激活基因1规格48T/96T NE-B*人重酒石酸去甲肾上腺素规格48T/96T TAF*人肿瘤血管生长因子规格48T/96T TAA*人肿瘤相关抗原规格48T/96T TSA*人肿瘤特异性抗原规格48T/96T TSGF*人肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子规格48T/96T TRANCE*人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子规格48T/96T TRAIL-R4*人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4规格48T/96T TRAIL-R3*人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3规格48T/96T
SV40转染人成骨细胞；hFOB 1.19培养肝脏型脂肪酸结合蛋白抗原LFABP/FABP-1(LiverFattyacidbindingprotein)肝脏型脂肪酸结合蛋白抗原0.5mgLFABP/FABP-1(LiverFattyacidbindingprotein 肝脏型脂肪酸结合蛋白抗原LFABP/FABP-2(LiverFattyacidbindingprotein)肝脏型脂肪酸结合蛋白抗原0.5mgLFABP/FABP-2(LiverFattyacidbindingprotein Lgr5/GPR49肠上皮干细胞蛋白（多肽）0.5mgLgr5/GPR49肠上皮干细胞蛋白（多肽 LH(LuteinizingHormone)人促黄体生成素(多肽)0.5mgLH(LuteinizingHormone 促黄体生成素抗原LH(LuteinizingHormone)促黄体生成素抗原0.5mgLH(LuteinizingHormone 人促黄体生成素受体抗原LH/CGReceptor(LuteinizingHormone/ChoriogonadotropinReceptor)人促黄体生成素受体抗原0.5mgLH/CGReceptor(LuteinizingHormone/ChoriogonadotropinReceptor L-组氨酸脱羧酶抗原L-HDC(L-Histidinedecarboxylase)L-组氨酸脱羧酶抗原0.5mgL-HDC(L-Histidinedecarboxylase 肝肠钙粘连蛋白抗原LI-cadherin(liver-intestinecadherin)肝肠钙粘连蛋白抗原0.5mgLI-cadherin(liver-intestinecadherin
冷冻保存细胞之方法：
SV40转染人成骨细胞；hFOB 1.19培养冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 |
