细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）人急性髓性白血病细胞；KG-1a培养准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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细胞名称 人急性髓性白血病细胞；KG-1a培养
形态特性骨髓瘤细胞样 生长特性贴壁生长 特征特性 培养条件IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium新生牛血清，20% 传代方法2x10-5细胞/ml 传代情况 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测培养法（-） STRAmelogenin:X,Y；CSF1PO:7；D13S317:11,12；D16S539:10,11；D18S51:10.2,18；D21S11:28,29；D3S1358:15,16；D5S818:13；D7S820:8,10；D8S1179:13,14；FGA:22；PentaD:8,9；PentaE:7,13；TH01:7,8；TPOX:7,9；vWA:14,19 同工酶 染色体
注意事项：
1.一般客户拿到人急性髓性白血病细胞；KG-1a培养后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
TGF-β1*鸡转化生长因子β1规格48T/96T MHC/B*鸡主要组织相容性复合体规格48T/96T TRAIL-R3*鸡肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3规格48T/96T TNF-α*鸡肿瘤坏死因子α规格48T/96T LPS*鸡脂多糖/内毒素规格48T/96T ACAC*鸡乙酰乙酸检测规格48T/96T IGF-1*鸡胰岛素样生长因子1规格48T/96T NADPH*鸡烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸规格48T/96T PF-4/CXCL4*鸡血小板因子4规格48T/96T NO*鸡血清一氧化氮规格48T/96T
人急性髓性白血病细胞；KG-1a培养*Anti-DRD3多巴胺受体D3抗体规格：0.1ml *Anti-DAT1多巴胺转运蛋白抗体规格：0.2ml *Anti-DRD4多巴胺受体D4抗体规格：0.2ml *Anti-DRD5/DopamineReceptorD5多巴胺受体D5抗体规格：0.2ml *Anti-DBC1膀胱癌缺失基因1规格：0.2ml *Anti-Phospho-DBC1(Thr454)磷酸化膀胱癌缺失基因1规格：0.1ml *Anti-DBH多巴胺β羟化酶抗体规格：0.1ml *Anti-DCC结肠直肠癌缺失基因抗体规格：0.1ml *Anti-DCIR/CLEC4AC型凝集素结构域家族4成员A抗体规格：0.2ml *Anti-DCN/Decorin核心蛋白聚糖抗体规格：0.1ml
冷冻保存细胞之方法：
人急性髓性白血病细胞；KG-1a培养冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 |
