细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）小鼠网织细胞肉瘤；M5076图片准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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细胞名称 小鼠网织细胞肉瘤；M5076图片
形态特性梭 生长特性半悬浮生长，贴壁细胞呈短梭 。 特征特性该细胞来源于C57BL/6小鼠卵巢组织自发的网织细胞肉瘤，经细胞 态和功能鉴定后为巨噬细胞来源：该细胞具有吞噬活性；表达Fc受体，与绵羊红细胞 成玫瑰花环；对51Cr标记的红细胞具有抗体依赖的细胞毒反应；对同源小鼠肿瘤细胞（B16-F1）有巨噬细胞样的细胞毒作用，且不需要LPS的激活；没有NK细胞的活性；具有同小鼠腹腔巨噬细胞相当的溶菌酶、非特异性酯酶和磷酸酶的活性；超微结构显示该细胞内有吞噬小泡，缺乏紧密连接，这些特点都符合巨噬细胞的
注意事项：
1.一般客户拿到小鼠网织细胞肉瘤；M5076图片后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
*Anti-Lxn(Latexin)/FITC荧光素标记羧肽酶抑制剂抗体IgG规格：0.2ml *Anti-ATEXPA10/FITC荧光素标记植物延长蛋白（拟南芥）IgG规格：0.2ml *Anti-Ly-6G/FITC荧光素标记淋巴细胞抗原6G抗体IgG规格：0.2ml *Anti-LY-86/MD-1/FITC荧光素标记MD-1蛋白抗体IgG规格：0.2ml *Anti-LY-96/MD-2/ESOP-1/FITC荧光素标记MD-2蛋白抗体IgG规格：0.2ml *Anti-Lysozyme/FITC荧光素标记溶菌酶抗体IgG规格：0.2ml *Anti-Phospho-Lyn(Tyr507)/FITC荧光素标记膜相关蛋白酪氨酸激酶Lyn抗体IgG规格：0.2ml *Anti-Phospho-Lyn(Tyr396)/FITC荧光素标记磷酸化膜相关蛋白酪氨酸激酶Lyn抗体IgG规格：0.2ml *Anti-Phospho-Lyn(Tyr497)/FITC荧光素标记磷酸化膜相关蛋白酪氨酸激酶Lyn抗体IgG规格：0.2ml *Anti-LYVE-1/FITC荧光素标记淋巴管内皮透明质酸受体抗体规格：0.2ml
小鼠网织细胞肉瘤；M5076图片*Anti-cofilin/FITC荧光素标记兔抗人、大、小鼠丝切蛋白抗体IgG规格：0.2ml *Anti-Phospho-Cofilin(Ser3)/FITC荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化丝切蛋白抗体IgG规格：0.2ml *Anti-Cortactin/FITC荧光素标记兔抗人、大、小鼠皮层肌动蛋白抗体IgG规格：0.2ml *Anti-Cortactin(phosphoTyr466)/FITC荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化皮层肌动蛋白抗体IgG规格：0.2ml *Anti-COLEC12/CL-P1/FITC荧光素标记凝集胎盘蛋白1抗体IgG规格：0.2ml *Anti-GlycodelinA/PP14/FITC荧光素标记胎盘蛋白14抗体IgG规格：0.2ml *Anti-Clusterin-Alpha/Beta/FITC荧光素标记凝聚素α/β抗体IgG规格：0.2ml *Anti-C-Myc/HRP(MYC/MTLC)辣根过氧化物酶标记致癌基因C-Myc抗体IgG规格：0.2ml *Anti-C-Mer/MERTK/FITC荧光素标记c-mer原癌基因酪氨酸激酶抗体IgG规格：0.2ml *Anti-C-Met/HGFR/FITC荧光素标记肝细胞生长因子受体(原癌基因蛋白)抗体IgG规格：0.2ml
冷冻保存细胞之方法：
小鼠网织细胞肉瘤；M5076图片冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 |
