人角膜上皮细胞提取物说明书

人角膜上皮细胞提取物【Human Eye: Normal Corneal Epithelial Cells Derivatives】

人角膜上皮细胞提取物是从人原代角膜上皮细胞提取的，人原代角膜上皮细胞从正常人角膜上皮组织制备。正常人角膜上皮组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

 运输和保存：

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

树脂型™基因组DNA提纯试剂盒0次5-O-Ethylcleroindicin D4881382

树脂型™PCR产物纯化及胶回收试剂盒0次5-Hydroxymethyl-furoic acid633815-羟甲基-糠酸

硅胶膜型™质粒DNA小量提取试剂盒次(2Z,6Z,E,14E,18E)-Farnesylfarnesol6953

硅胶膜型™基因组DNA提纯试剂盒次Solanesol1317茄尼醇

硅胶膜型™PCR产物纯化及胶回收试剂盒次Methyl (9Z,11E)3-hydroxyoctadeca,11-dienoate98375
N-Acetyl-D-tryptophan  2280/1/5  中文名：N-乙酰基-D-色氨酸  分子式：C13H14N2O3    三0酸腺苷酶   英文名称：   Adenosine iphosphate   规格：   48T/96T   英文缩写：   ATP

Allyl cinnamate  1866-31-5  中文名：肉桂酸烯丙酯  分子式：C12H12O2    紧张素Ⅱ一型受体抗原   英文名称：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aigen   规格：   48T/96T   英文缩写：   AT1R

2-Aminofluorene  153-78-6  中文名：2-氨基芴  分子式：C13H11N    抗紧张素‖受体︱型自身抗体   英文名称：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aoaibodies   规格：   48T/96T   英文缩写：   AT1R-AA

(1R,2S)-1-Amino-2-indanol  136030-00-7  中文名：(1R,2S)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO    紧张素Ⅰ   英文名称：   AngiotensinⅠ   规格：   48T/96T   英文缩写：   ANGⅠ

Amitraz  33089-61-1  中文名：双甲眯  分子式：C19H23N3    三(羟甲基)基盐酸盐   100g
乙酸铵(分子生物学级)  Ammonium acetate  质量规格：>98%,分子生物学级 单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA检测试剂盒Monkeymonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP1/MCAFELISAkit 96T/48T

微晶纤维素(100 um)  Cellulose, Microcrystalline  质量规格：BR,100 um 单核细胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20

乳糖；α-乳糖,一水  alpha-Lactose, monohydrate  质量规格：BR 单酸甘油脂脂解酶(monoacylglycerollipase)活性比色法定量检测试剂盒20

氯化钙二水  Calcium chloride, dihydrate  质量规格：>99%,BR 单线态氧气清除(scavenging)活性比色法筛选试剂盒20

乙二醇  Ethylene glycol  质量规格：BR 单线态氧气清除(scavenging)活性荧光筛选试剂盒20

硫酸镁七水(分子生物学级)  Magnesium sulfate, heptahydrate  质量规格：>98%,分子生物 胆转运功能检测试剂盒20

糖化酶;葡萄糖淀粉酶  Glucozyme  质量规格：BR,10万u/G 胆红素(Bilirubin)定量检测试剂盒50

聚乙二醇4000  PEG 4000  质量规格：>99%,BR 胆碱酯酶(CHE)定量检测试剂盒50

无水氢二钾  Potassium phosphate, dibasic, anhydrous  质量规格：>98%,BR 胆碱酯酶(CHE)活性比色法定量检测试剂盒20

甲酰胺  Formamide  质量规格：>99%,BR 淡绿(LIGHTGREEN)复染试剂盒50
人角膜上皮细胞提取物说明书trans-4-Aminocyclohexanol  27489-62-9  中文名：  分子式：C6H13NO  度：98.0%  关键词：    小鼠过氧化物酶体增殖物活化受体γ   英文名称：   Mouse Peroxisome Proliferators Activated Receptor γ   规格：   48T/96T   英文缩写：   PPARγ

Tranexamic acid  1197-18-8  中文名：凝血酸  分子式：C8H15NO2  度：98.0%      小鼠诱导型合成酶elisa试剂盒   小鼠诱导型合成酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠诱导型合成酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠诱导型合成酶试剂盒、小鼠诱导型合成酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Torososide A  165689-32-7  中文名：  分子式：C38H32O15  度：%  关键词：  植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠内皮型合成酶elisa试剂盒   小鼠内皮型合成酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠内皮型合成酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠内皮型合成酶试剂盒、小鼠内皮型合成酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Topiramate  97240-79-4  中文名：托吡酯  分子式：C12H21NO8S  度：98.0%  关键词：    豚鼠神经肽Belisa试剂盒   豚鼠神经肽B试剂盒   规格型号：96T/48T   豚鼠神经肽B试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：豚鼠神经肽B试剂盒、豚鼠神经肽Beisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Tolvaptan  150683-30-0  中文名：托伐普坦  分子式：C26H25ClN2O3  度：98.0%  关键词：    小鼠游离脂肪酸elisa试剂盒   小鼠游离脂肪酸试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠游离脂肪酸试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠游离脂肪酸试剂盒、小鼠游离脂肪酸eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。