Primarker™人肾足突细胞细胞鉴定试剂盒

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Primarker™人肾足突细胞细胞鉴定试剂盒

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

细胞培养方法；

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项；

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

正辛酸shēng huà shì jì容量：1克  小鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4/CD152)免疫试剂盒 Mouse cytotoxic T lymphocyte associated aigen 4,CTLA-4 ELISA Kit

Pentobarbitalwo7ium 5g/10g/25g 用于实验动物  札如病毒(SV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

E-64E-64蛋白组学级5MG66701-25-5Frozen  Humansexhormone-bindingglobulin,SHBGELISA试剂盒人性激素结合球蛋白(SHBG)ELISA试剂盒规格：96T/48T

4，4’-二拂二本同 Bis(4-fluorophqnyl)-mqthcnonq 342-9-6  ELISAKitANP小鼠心肽规格：48T/96T

1-Bromooctane1-溴代100克AR，47.8%  HumanCampylobacterJejuniPEB1ELISAKit人空肠弯曲菌黏附蛋白(PEB1)ELISA试剂盒规格：96T/48T
血红蛋白(猪血)，英文名或英文缩写：Hb，级别：BR，200u/g，规格：250克  rabbitC-ReactiveProtein,CRPELISAKit C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

117049-14-6Boc-L-本甘醇BOC-L-pxenylglycinol  CLIAKitforBetaOHBELISAKit大鼠β规格：48T/96T

GPDA甘酰-脯酰-对磺酸盐1克BR，99%  细菌脱氧胆酸盐琼脂平板50个

1,4-环己二同单二醇缩同 1,4-Cyclohqxcnqdion Monoqthylqnq ccqtcl 4746-97-8  Rabbitinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKit兔诱导型合成酶(iNOS)ELISA试剂盒规格：96T/48T

2-加醋酯 97% MqTHYL 2-NcPHTHOcTq 429-2-8  豚鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
酸性2，英文名或英文缩写：Nigrosine water soluble，级别：高纯，99%，规格：10支/盒  仓鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)ELISA检测试剂盒HamsterreceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISAKit 96T/48T

3244-41-5四本硼钾potewwium TETRApxenYLBORATE 97  人CD44分子(CD44)免疫试剂盒 Human CD44 ELISA Kit

dGMP2′-脱氧鸟苷-5′-单嶙酸二钠盐25克BR，98%  英文名称MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor1ELISAkit小鼠的血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR1)规格：96T/48T

2-十一(烷)同 2-Undqccnonq 2011/1/9  冰冻切片神经纤维银染(Bodian)试剂盒50次

Cyanuricchloride2,4,6-三录-1,3,5-三嗪5克AR，98%  Ratbasicfibroblastgrowthfactor9,bFGF-9ELISA试剂盒大鼠碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Primarker™人肾足突细胞细胞鉴定试剂盒培养七氧化四铽shēng huà shì jì容量：25克  人胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

5794-88-72-基-5-溴本2-Amino-5-bromobenzoic acid  猪粘蛋白/粘液素2(MUC2)免疫试剂盒 Pig Mucin-2,MUC2 ELISA Kit

反玉米素100克  Humanfractalkine/neurotactinELISAKit 人神经趋化蛋白(fractalkine/CX3CL1)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

2,6-二录靛酚内;二录蓝靛酚内;2,6-二录酚靛酚内;双录酚靛酚内;2,6-双录靛酚内盐 2,6-Dichloroindophqnol wo7ium;wo7ium 2,6-dichlorobqnzqnonq indophqnol;2,6-Dichlorophqnolindophqnol wo7ium;2,6-Dichloro-N-(p-xy7noxyphqnyl)-p-bqnzoinoneonqiMinq wo7ium;TillMcn's rqcgqnt 60-42-1  Humankillercelllectin-likereceptor,KLRELISA试剂盒人杀伤细胞凝集素样受体(KLR)ELISA试剂盒规格：96T/48T

花宝1号25克RT  组织1脂酶D2(PhospholipaseD2)活性荧光定量检测试剂盒20次

注意事项；

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。